Штамм микроскопического гриба -3-продуцент линазы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 09) 011 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ТВ ВТОР СН рохов,ова и Ю.И,Гон ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) 1. Авторское свидетельство ССС В 734273, кл, С 12 М 15/00, 1978.2. Мухамеджанова Т.Г., Безбородов А.М, Влияние источников азота и углерода на накопление липазы грибо ВЬ 1 горцв огуаае 1414.-"Прикладная биохимия и микробиология", 1982, 18, В 1, с. 16 - 22 (прототип),150 С 12 М 15/00; С 12 Ы 9/20; С 12 В 1/845(54) ШТАММ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА ВНТЕОРП 8 ОВУЕАЕ ИЕМТ ЕТ РВТИ СЕЕЮ. АС- ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ.(57) Штамм микроскопического гриба ВЬ 1 корпв огугае ИепЕ ес ргп Сеег 1 паз АС(коллекция Центрального музея промьппленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селек" ции промышленных микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПМ -223) продуцент липазы.1 11120Изобретение относится к Ферментной отрасли промышленности ." представляет собой ноный штамм микроскопического гриба, который можетбыть использован для получения фар "5мента липаэы, применяемого н пищевой.,кожевеннойхнмическои отрасляхпромышленности и н синтетическихмоющих средствах для частичного илнполного гидролиэа жиров различнойприроды, н медицине и сельском хозяйстве.Известны штампы микроорганизмовпродуцентон липазы, к которым относится штамм Репхсг 111 цш но 1 гцш1Уенг 11 пд ЛИА-Т- продуцент липолитического Фермента,При глубинном культивировании на96 - 115 ч ферментации обеспечивается активность 1370 - 1550 ед/мп,20Питательная среда - пептон, глицерин, соли, рН 6,9, температура24 С 13,Наиболее близким по техническойсущности и достигаемому эффекту к2 Бпредлагаемому является штамм ВЫкорцзогугае 1414, который вырапрвают глу -бинным способом при=.30 С на качалке н течение 3 сут на среде, содержащеи, /с. соевая мука 1,22; ккурузный крахмал 0,24: кукурузный экстракт 00,25, олеиновая кислота 0,56, прирН 7,0, Максимальная активность,определяемая методом Отд и Ямада,составляет 13800 ед/мп Г 23 .Недостатком известных штаммон-про дуцентон является низкий уровеньактивности лнпазы.Цель изобретения - выделение штамма микроскопического гриба, обладающего повьпиенной способностью к биосинтезу липазы.Предлагаемый штамм ВМгорцз огукаеЖепе ег; Рг 1 п. Сеег 11 пяз АСвыделен из сточных бытовых нод Домодедонского района Московской области, 45подвергнут рассену .с выделениеммоноспороной культуры, многократнымпассажам на агаризонанной смеси вытяжки из солодОвых ростков н отвараотрубей или на агаризованном ячмен- =,Оном сусле, а также хранению в течение 5 лет. Штамм отличается устойчивыми морфологическими свойствая,Культивирование Вйхяорпн огукае11 епг ег Рггп СеегБпян АСпроводили на питательной среде, содержащей, Й; соевая мука 1,22; кукурузный крахмал 0,24; кукурузный экст 60 3ракт 0,25, олеиновая кислота 0,56,рН среды 7,0, температура 30 С,гэробные условия условия, указанныен прототипе). АктивноСть определялипо методу Ота и Ямада, Активностьпри этом составила 20650 ед/мп поср,ннению с 13800 ед/мл у извест"ного штамма, За единицу активностипринимается такое количество Фермента, которое способно высвобождать 1микромоль олеиновой кислоты из 407 ной эмульсии оливкового масла зач при 37 С,Проверкой, проведенной в течение4 лет, установлено, что при хранении и пересевах уровень активностилнпаэы ВЬгхорин огуяае Непа ег РггпСеегЫпрн АСне снижается.Штамм В;Я.горца огуяае Уепс егРггп Сеег 11 пдн АСхарактеризуется следующими морфологическими икультурально-биохимическими призча.ками, позволяющими отличить его отдругих штаммов,Морфологические признаки. Колониихорошо спороносящие, с хорошо развитым воздушным мицелием, рыхло-войлочные, высотой 0,8-1,2 см. Колонии пестро-серые, Мицелий плохо смачивается водой. Стнлоспорангиеносцы прямые, буроватые, отходят по 1 - 3 от шейки риэоида, Ризоиды короткие. Стилоспорангнн 50 - 150 мк в диаметре. Колонкаэлпиптически-шаровидная 40 - 8035 - 70 мк, коричневатая, Спорангиеспоры шаронидно-эллиптические 5,5 - 8 Х 5 - 6 мк, болееили менее хорошо исчерченные, коричневато-серые, Штамм термотолерантный с максимумом 42 - 43 фС,Культуральные признаки. На синтетической агаризованной среде Чапека с пептоном растет быстро. На 1 сутколонии состоят из бесцветного,ползучего, волокнистого мицелия.,Споры образуются на 2-3 сут, На среде с кукурузным экстрактом и эфиромобразуется воздушный мицелий,На сусло - а.аре колонии через 2 сутсветло-серого цвета, Мицелий серова 1 ого от Р 1 нка 9 плотный у пушистыйСпороносная зона темно-серого и черного оттенков. На 3 сут спороношениеобильное, обратная сторона колониижелтоватая, Колонии растут быстро,достигая краев чашки, На пшеничныхотрубях растет хорошо. Через 2 сут3 11 отруби полностью пронизаны белым ми" целием и покрыты серочерными спорами. На 3 - 4 сут образуется плотный корж, проросший высокимвоздушным мицелием.Отношение к углеродному питанию. Усваивает глюкозу, лактозу, сахароэу, мапьтозу, крахмал, глицерин из жиров " хлопковое, оливковое, подсолнечное, горчичноеперсиковое масла, кашалотовый, говяжий жиры.Отношение к азотному питанию, Усваивает нитраты, лучше азот в аммонийном форме, Из органических источников азота ассимилирует пептон, желатин, казеин, дрожжевой экстракт, мочевину, кукурузный экстракт.Отношение к температуре. Мезофил,температура 20 - 43 оС, оптимальнаятемпература 28 - 30 фС,Отношение к кислотности среды.Растет в широких пределах рН от3,0 до 9,0, оптимум рН 7,0 - 8,0.П р и м е р 1. Штамм Юиворцзогугае Непа ег Веп АСвыращиваютв глубинных условиях на среде, содержащей, 7: соевая мука 2; дифосфат аммония 0,6; фосфат калия 0,1;сульфат магния 0,05; поливиниловыйспирт 0,3; оливковое масло 0,5,рН 7,0 - 7,2, при 30 фС в течение51 ч. Максимальная активность липаэы 15360 ед/мл.П р и м е р 2.ШтаммВЬ.огувае Непаег Ргп АСвыращивают на качалкена среде прототипа при 30 С в течениее3 сут. Максимапьная активность липазысоставляет 20650 ед/мп, рН среды 7,0.П р и м е р 3. Штамм ВЬ. огуваеНепа ег Ргдп Сеег 1 п 8 в АСвыращивают на качалке на среде, содержащей, Х: соевая мука 3; сульфат аммония 1,38; сахароза О, 13; мел 0,521дикалий фосфат 0,2; сульфат магнияО,1; оливковое масло 0,5, рН 7,0,время роста 80 - 90 ч. Активность14230 ед/мп,П р и м е р 4. Штамм ЕЬ, огуваесепг ег РгЫ Сеег 1 пщв АСвыращивают на среде прототипа при тех жеусловиях, но при рН 3,0. Активностьпри этом составляет 2500 ед/мп.П р и м е р 5. Штаьви выращиваютна среде, содержащей, У: глюкоза 3;соевая мука 2; кукурузный экстракт 3;казенн 2; американский лесной орех12060 4 1 О 35 45 Я 55 2; СаСО 2; М 50 0,05, рН 6,0, С 24 фС, время 48 ч. Активность при этом составляет 7230 ед/мп.П р и м е р 6. Культуру ВЫворце огугае сепг ег Рг 1 п СеегИпвв АСвыращивают на среде прототипа при тех же условиях, но при рН среды 9,0. Активность при этом составляет 4280 ед/мп.Таким образом, выделенный новый штамм по сравнению с прототипом обладает преимуществами, заключающи" мися в повышенной (на 503) способности к биосинтезу целевого продукта - липазы, в устойчивом росте в ши" роком диапазоне начальной кислотности среды (рН 3,0 - 9,01, пригодности для поверхностного культивирования. Микроскопический гриб. ВЬдкорцз огугае Непа ег Ргдп Сеег 1 ьп 8 в АСпредставляет собой новую культуру со стойкими морфологическими и биохимическими свойствами и признаками.Использование предлагаемого штамма дает возможность при организации производства липазы в СССР получить высокоактивные препараты липазы с болыним выходом.Липаза, продуцируемая В 1 пгорцз огугае Непа ег РгЫ Сеег 1 ьпяв АСотличается широким диапазоном рН-действия от 3,0 до 8,0) с оптимумом действия рН 6,0 - 7,0. Она отличается широкой субстратной специфичностью н способностью частично или полностью гидролизовать различные природные жиры и масла и синтетические триглицериды, что открывает саиае широкие перспективы ее применения в таких отраслях народного хозяйства, как кожевенная и меховая, сыроделие, рыбная промышленность. Ферментативный гидролиэ растительного сырья лнпазой позволит заменить дорогой и трудоемкий способ щелочной высокотемпературной деструкции с целью получения жирных кислот и глицерина. Частичный гидролиэ позволит получать моноглицериды, применяемые в пищевойл промышленности в качестве эмульга- торов. Стабильность в широком диапазоне рН и активность в кислой и слабощелочной зоне открывает возможность применения в медицине, так как липаза ВЬдаорцв огувае Чепэ ей Рг 1 п Сеег 1 дтщв АСактивна на всех этапах желудочно-кишечного тракта.