Способ получения глюкозоизомеразы

,И.Бах тво СССР1975.о СССР1975. ЛЮКОЗО- й культиов на пиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕП.НИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОР(НОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 433558/28-136058250884Бюл. Р 30(71) Институт биохимии им(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯИЗОМЕРАЗЫ, предусматриваювирование штаммов-.продуце тательной среде, содержащей источникуглерода, азота, ростовые вещества,минеральные соли, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повыщения активности целевого продуктаи снижения его себестоимости, в качестве источника азота используюттворожную сыворотку, причем в случаеприменения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержа нием сухих веществ 18-19, 5 в количестве 8-10 об.,а в случае применения вкачестве продуцентов молочнокислыхбактерий - нативную сыворотку, которая является основой среды.1,045 Для А.О 11,чосхпегецв 154 способ включает высушивание промытой дистиллированной водой биомассы, экстракцию буфером, фракционирование ацетоном и сульфатом аммония, гель- хроматографию на сефадексе Ж, кристаллизацию гомогенного фермен-. та; для ЬЬ.Ьгечв 74- фракционирование бесклеточного экстракта сульфатом аммония,ионообменную хромато"; графию на ДЭАЭ-целлюлозе.Однако согласно известным способам получения глюкозоизомеразы це 60 65 Изобретение относится к микосбиологической промышленности, вчасфности к производстну ферментных препаратов, и может найти применениев микробиологической промышленности,крахмалопаточной, пищевой для получения глюкозно-фруктозного сиропа изгидролизатов крахмала,Известен способ получения глюкозоизомеразы, предусматривающий культивирование продукта АсС 1 повусее чепегие а 1 е 332 на питательной среде, содержащейВ -ксилозу, пептон, дрожжевой экстракт 1 КЕНРОМР МдЯОФ и агар. Активность полученной культуральной жидкости 10"11,0 мг 2-фруктозы на 1 мл 5культуральной жидкости 111.Наиболее близким по техническойсущности и достигаемому положительному эффекту к предложенному является способ 121, получения высокоочищенной глюкозоизомеразы из АС 11 пошусев о 11 чос 1 иегецз 154 и из молочно,кислой бактерии 1 асСОЬас 111 ив Ьгеч 1 в74, предусматривающий культивирование штаммов продуцентов на питательных средах следующего состава, г/лА, Жчосз. - ЬЬ.Ьгеч 1 в 74пегеця . 154Ксилоза 7 КсилозаГлюкоза 3 ГлюкозаПептон 10 ПептонЭкстракт Экстрактсолодовых СОЛОДОВЫХростков ростков(20-ная (20-наявытяжка) 20 мл вытяжка) 25 млили илиДрожжевой -Дрожжзвойэкстракт 2,5 экстракт 25Кукуруз- Натрийный экс- уксуснотракт 20 кислый 10Натрий Марганецхлористый 5 сернокисКобальт лыйхлористый 0,13 КобальтМагний хлористый 0,1сернокис- Вода водолый 0,5 пронодВода водо- ная до 1,0 л,проводная до 1,0 л рН среды б,5рН среды 7,0 левой продукт получается с недостаточно высокой активностью, а такжедорогой, так как культивированиештаммов-продуцентов осуществляетсяна среде, содержащей дорогостоящийкомпонент - пептон.Целью изобретения является повышение активности целевого"продуктаи снижение его себестоимости.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу получения глюкозоизомеразы, предусматривающему культивирование штаммовпродуцентон на питательной среде,содержащей источники углерода, азота, ростовые вещества, минеральныесоли, в качестве источника азотаиспользуют творожную сыворотку, причем в случае применения в качествепродуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием сухихвеществ 18-19,5 в количестве 810 об., а в случае применения икачестве продуцентов молочнокислыхбактерий - нативную сыворотку, которая является основной среды.Использование н составе средмолочной сыворотки способствует созданию безотходной технологии н молочной промышленности.,Предлагаемый способ полученияглюкозоизомеразы включает следующиестадии: приготовление посевной культуры, выращивание штаммон-продуцентон на видоизмененной среде, отделениебиомассы и отмывки ее,от остатконсреды путем центрифугирования при2000 н течение 20 мин, высушинаниебиомассы или использование н сыромвиде для получения целевого продукта,П р и м е р 1. Препарат глюкозоизомеразы А.О 11 чосдпегеив 154 получают выращиванием продуцента на питательной среде, которую готовятследующим образом: к 300 мл водопроводной воды добанляют 7 г ксилозы,3 г глюкозы, 5 г хлористого натрия,0,5 г сернокислого магния, 0,13 гхлористого кобальта, перемешиваютдо растворения, добавляют 20 мл экстракта солодовых ростков (20-наявытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, затем добавляют 100 мл упаренной сыворотки (сухих веществ18-19,5), объем раствора доводятдо 1 л водопроводной водой, подщелачивают 0,1-1 н , БаОН до рН 7,0,Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемому способуувеличивается на 22 по сравнениюс известным способом, а биомассана 43,8, если испольэовать в составевидоизмененной среды упаренную молочную сыворотку.П р и м е р 2, Препарат глюкозоиэомераэы 1 Ь.Ьгеч 3.в 74 получают выращиванием продуцента на.питательной1108107 Среда Продуцент глюкозоизомеразы актиномицета 100 100 С нативной молочной сывороткойС упаренной молочной сывороткой 93 77,2 122 143,8 Продуцент глюкозоизомеразы молочнокислой бактерии 100 100 122 130 С нативной молочной сывороткой С упаренной молочной сывороткой 101 91 Составитель И,ПриваловаРедактор Т,Колб Техред М.Гергель Корректор.Ц.Мельниченко Заказ 5838/18 Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Филиал ППЛ Патент, г.ужгород, ул,Проектная,4 среде, которую готовят следующимобразом: к 300 мл водопроводной воды добавляют 10 г ксилозы, 15 г ксилозы, 1 г глюкозы, 10 г уксуснокислого натрия, 1,0 г сернокислого марганца, 0,1 г хлористого кобальта,перемешивают до растворения, добавляют 25 мл экстракта солодовых ростков (25-ная вытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, 100 мл нативноймолочной сыворотки с содержанием6,8-7,1 сухих веществ, объем раствора доводят до 1 л водопроводнойводой, подщелачивают 0,1-1 Н . БаОНдо рН 6,5, Среда может быть приготовлена на нативной молочной сыво-.ротке вместо водопроводной воды безпептона. Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемомуспособу, увеличивается на 22 посравнению с известным способом, абиомасса - на 30; если использоватьв составе среды нативную сыворотку.В таблице представлены сравнительные данные по активности и накоплению биомассы продуцентов глюкозоизомеразы, .полученные по известно-.му и предлагаемому способу,С пептоном и кукурузным экстрактомконтроль С пептоном и кукурузным экстрактомконтроль Предлагаемый способ позволяет повысить активность глюкозоизомеразы нана 22 за счет введения в состав питательной среды молочной сыворотки.Удешевление способа происходит 5 эа счет применения питательной средыс использованием отхода молочной промышленности - молочной сыворотки,которая представляет собой новыйкомпонент среды для выращивания про дуцентов глюкозоизомеразы, причемпептон полностью заменен новым компонентом. Применение молочной сывороткиобеспечивает возможность получения готового продукта в зависимости от цели, актиномицентного или бактериального происхождения, что расширяет ассортимент ферментов, а также 20 позволяет создать безотходную технологию в молочной промышленности. При использовании предлагаемоГо способа отпадает необходимость приобретения ценного реактива за рубежом (пептона). г Вес .воздушно-.сухой. Активность глюкоэобиомассы,изомеразы,