Штамм n6, используемый в качестве тест-культуры для определения активности интерферона

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 828 О 8 А 119) 111) 315 И С 1 2 И 1 5 /О 0 / / А 6 1 К 4 5 С1 2 В . 1 / 4 5 ГО П САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ НЯ ЕР 1 ОЕВМ КАЧЕСТВЕ ЕЛЕНИЯ АКТЕР 11)ЕВМ 1 Л.А.Тарай в качеделения ый мед зводству-69. РСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(71 ) Пермский государствецинский институт(56) 1. Регламент по проинативного интерферона 1341082808 Изобретение относится к микробио.-.логии и может быть использовано припроизводстве интерферона,Известно использование вируса Вкачестве тест-культуры для определения: активности интерферона 1 3.5Однако использование вируса а,ка"честве тест-культуры усложняет опре.деление активности интерферона, такках требует подготовки культур кле.ток, что является длительной и сложной процедурой,Цель изобретения - упрощение определения активности интерферона.Доставленная цель достигается тем,что используют штамм Яарпу 1 ососсцеерЫегш 161 з Р б.Штамм 81 арЬу 1 ососсия ерхйегш 161 а9 6 выделен из окружающей среды.Хранится в коллекции РИСКим, Л.А.Тарасевича под номероМ 33 ихарахтериэуется следующими признаками,Морфологические признаки,Клетки имеют форму шаров диаметрам 0,5-0,8 мкм, группируются а скопления, напоминающие гроздья внногра 25да, окрашиваются грамположительно,йелодвижны и не образуют спор и капсулеКультуральные признаки.Мясопептонный агар, молочносолевой агар. Колонии белого цвета, равГмерновыпуклые с ровным краем,ладкой матовой поверхностью, диаметроМ 1,0-1,5 мм, Колонии легко снимаются с агара бактериальной петлей. 35Мясопептонный бульон, сахарныйбульон. Помутнение бульона и небольшой осадокфизиологические признаки.Отношение к кислороду; факультатканый азроб. Оптимальная температура для размножения 37 оС,Глюкоза, лактоза,мальтоза,галактоза,сахароза, глицерин-сбраживание докислоты без выделения газа. 45Результаты использовадля выявления уровня интерфе Антибактериальный титр интерферона Антивирусныйтитр интерферона по задержке ЦПД в культуре клеток Объект исследования 1 в 128 1128 1:64. 1 ф 2048140961:5121:64132 1:2 1:4 цельная Нативный препарат человеческого лейкоцитарного интерферона выпуска ПНИИВС, серия340 285 Сыворотка крови донора АМЬлоко свертывает. Желатин раэжижает.Нитраты аосставнавливает в нитрнты.Образует аммиак и сероводород,Культура не однородна по синтезус-гемотоксина.Плазмокоагулазу не имеет,Лецитовителлазу не имеет.ДНК-аэу не имеет.Новобиоцион - чувствителен.Резистентен к лизоцину сыворотки крови.Комплементу резистентен, Препаратинтерферона - чувствителен, Погибаетили перестает размножаться в зависимости от активности препарата интерферона при прямом контакте в течение 18 ч (Ф 37 оС ),Н р и м е р 1. Готовят последовательные разведения препарата интерферона мясопептонным бульономв объеме 1,0 млв пробирках. Затем пбмещают в пробирки пО 100000 Клеток стафилококка, предварительно выращенного на косом агаре в течение 18 ч. Пробирки выдерживают в термостате при 37 С в течение 18 ч. Учет результата опыта пРоводится визуально. За антибактериальный титр испытуемого интерферона принимают то его наибольшее разведение, при котором культура стафилококка не растет (содержимое соответствующей пробирки остается прозрачным ) Результаты выявления уровней интерферона в нативном препарате человеческого интерферона выпуска Пермского НИИВС и в донорских сыворотках крови приведены в таблице. Выявление интерферона в образцах проводили одновременно по задержке цитопатогенного действия (ЦДД ) в культуре человеческих фибробластов ( регламент 134-39 ) и бактериологическим методом серийных разведений. ния штамма В 6 стафилококка рона в сравнении с прототипом.:1082808 Составитель Г.Смирнова,Редактор Л,Пчелинская Техред И.Иетелева Корректор Г.РешетникЗаказ 1677/24 Тираж 522 , Подписное ВНИИПИ Росударственйого комитета СССР" по делам изобретеижй и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП фПатентв, Г.ужгород, ул.Проеютная, 4Как видно иэ таблицы, антибакте-риальная активность препаратов интерферона в отношении штамма 9 б выше антивирусного эффекта, находится в прямой зависимости от послед него и дает представление об антиви русной активности исследуемых объектов.. П р и м е р 2. С помощью штамма 9 б кожного стафилококка бактериалогическим методом серийных раэведе ний проведено исследование 100 серий нативиого препарата человеЧеского лейкоцитарного интерферона, выпускаемого Пермским НИИВС, 20 сывороток крови доноров, 47 сывороток крови онкологических больных и 25 сывороток лабораторных животных (морские свинки и кролики ).Получены следующие результаты. При титрацйи нативного препарата человеческого лейкоцитарного интерфероиа выпуска ПНИИВС в 96 Ъ сериях антибактерйальный титр превышал аитиВируснцй, в. том чйсле в 30 на 4,в 36 на 3., в 22 на 2 и в 6 , на 1 разведение,в 4 случаев актибактерйальный титр совпал с антивирусным В 20 донорских сыворотках интерферон выявлен в 100 по антибактериальному действию, а в 50 - по антивирусному.Из 47 сывороток ойологическнх больных интерферон выявлен в 2 сыворотках только по антибактериальному действию.В 25 сыворотках лабораторных животных интерферон выявлен в 22 случаях по антибактериальному действию.Как видно из примеров, штамм 8 арЬуХососсцв,ер 1 йегв 161 в 9 б обладает чувствительностью к препаратам интерферона разной видовой специфич,ности, что. позволяет использовать его в качестве тест-культуры для выявления уровня интерферона как в условиях производства препарата, так и в экспериментальных исследованиях,Использование штамма 8 арЬу 1 ососсцв ер Иег щЫ 1 в 9 б по сравнению с прототипом упрощает и удешевляет методику выявления уровней интерферона;",отменяет необходимость проводить солоные вирусологические исследования и значительно экономит время.