Способ определения концентрации стерина

, К. Малафриев ических исслетво СССР6, 1978 (прот ЛЕНИЯ КОН- биологических ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ АВТОРСХОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Научный центр биологдований АН Аз ССР(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЦЕНТРАЦИИ СТЕРИНА в объектах, включающий выделение неомыляемой фракции липидов, добавление органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения селективности способа, в качестве органического растворителя используют гептан, формируют из липидов бесслойную ,плоскую мембрану, дополнительно вводят в нее полиеновый антибиотик, измеряют стационарную проводимость мембраны и по уровню проводимости определяют концентрацию стерн на.,2 1 оВ 1 О холестено Ь холестенонКапронатхолестернна 10 41 О 40 45 Как предла именно ения калибровочры в гептане очидов бычьего мозином при соотноИзобретение относится к биофизике и биохимии липидов и может быть использовано в медицине, в частности в исследовании липидного обмена.Известен способ определения общего содержания холестерина в биологическом материале, включающий омыл ение липидов спиртовым раствором щелочи, экстрагирование неомыляемой фракции липидов петролейным эфиром, промывание экстракта дистиллированной водой, упаривание растворителя и добавление реактива для осуществления цветной реакции, причем омыление липидов проводят 25.30%- ным спиртовым раствором КОН в течение 12-15 ч для одновременного осуществления гидролиза биологического материала 111Недостатком известного способа является длительность процесса определения и неселективность, так как в процессе омыления липидной фракции происходит также и гидролиз эфиров холестерина с образованием свободного холестерина, что мешает определению нативных стеринов.Цель изобретения - ускорение и повышение селективности способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения концентрации стерина в биологических объектах, включающему выделение неомыляемой фракции липидов и добавление органического растворителя, в качестве последнего используют гептан, формируют из липидов бесслойную плоскую мембрану, дополнительно вводят в нее полиеновый антибиотик, измеряют стационарную проводимость мембраны и по уровню проводимости определяют концентрацию стерина.Способ осущес м обраИз исследуемого объекта выделяют общую фракцию липидов. Выделенные липиды (1,2 мг) растворяют в 100 мл гептана и из них формируют на отверстии тефлонового стаканчика бесслойную мембрану. В омывающий мембрану раствор (например, 100 мл КС 1, рН 6,5 вводят полиеновый антибиотик в концентрации 5 10 М и измеряют проводимость мембраны стандартными методами. По построенной ранее калибровочной кривой определяют концентрацию стерина в общих липидах. На фиг. 1 и 2 приведены графики, поясияюшие предлагаемый способ. Пример 1. Для постр ной кривой готовят раств щенных общих фосфолип га (20 мг/мл) с холесте 5 1 О 15 2 О 25 зо шении по весу холестерин (фосфолипид, равном 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,12. Формируют мембраны из каждого раствора в 10 мл КС 1, рН 6,5 при 22 С + 6 ф 10 М нистатина. Измеряют проводимость мембраны электрометрическим усилителем. По оси абсцисс откладывают соотношение холестерин фосфолипид, по оси ординат - удельную проводимость мембраны (фиг. 1).Исследуемая фракция - неочищенные фосфолипиды бычьего мозга. Проводимость мембраны 4 10 Ом см . По калибровочной кривой находят соотношение холестерин /фосфолипид = 0,07.Пример 2, Калибровочная кривая для значений соотношения холестерин/фосфолипид = 0,4 - 0,9 строится аналогично (фиг. 2). Исследуемая липидная фракция - смесь фосфолипидов с холестерином с неизвестным весовым составом. По кривой находим для = 10- Ом см. соотношение холестерин/фосфолипид = 0,8.Пример 3. С помощью указанного способа исследуют влияние на проводимость мембраны различных производных холестерина (соотношение стерин/липид 5 20, концентрация полиенового антибиотика лево- рина 5 10 М).Результаты представлены в таблице 1. следует из приведенных данных, емый способ высокоселекти вен соотношении стерина. Способ позволяет существенно ускорить определение концентрации стерина (время определения около 1 ч). Кроме того, повышается селективность определения, так как, например, эфиры холестерина не увеличивают проводимость мембраны. Способ может быть применен в биохимических лабораториях для экспресс-определения стерина, При этом потребное количество липидной фракции не превосходит 0,5 мг.итель С. Котел И. Верес 828твенного комретений и о 35, Раушска г. Ужгород,Состав Техред Тираж Государс лам изоб ква, Ж - Патент,фаарснцпуд(т вцевКорректор О. БилакПодписноеета СССРкрытийнаб., д. 4/5л. Проектная, 4