Способ определения вирулентности микобактерий туберкулеза

,80104 1 А 00 // С 12 й 1/00 р32 5 ПС 12 й С 12 й Е ИЗОБРЕТЕН ОПИС К АВТОРС П. Зыковсследоваза ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ У СВИДЕТЕЛЬСТ(46) 07.10.83, Бюл. 9 37 (72) О,. В. Гращенкова и М. (71) Ленинградский научно-и тельский институт туберкуле (53) 576.8.093.35(088.8)(56) 1. "Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях . М., "Медицина", 1949, с. 117-120.2. Зыков М. П., Поти С. Д. и Руле Е, Ускоренный метод определения вирулентности туберкулезных мико- бактерий. - "Журнал гигиены, эпиде миологии, микробиологии и иммунобиологии", 1972, М 16, с. 397-403 (про тотип).(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТ.НОСТИ МИКОБАКТЕРИй ТУБЕРКУЛЕЗА путем заражения морских свинок культурой мнкобактерий под твердую оболочку головного мозга с последующим учетом поражения органов, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа, учитывают появление параличей задних конечностей, и при появлении паралича до 19,2 дней после заражения определяют высокую степень вирулентности, на 19,3-24,1 день - среднюю степень вирулентности и на 24,2-30 день - слабую степень вирулентности.Изобретениеотносится к микробиологии и может быть использовано при бактериологическом обследовании больных туберкулезом.Изнестен биологический способ определения нирулентности микобак" 5 терий туберкулеза, предусматривающий заражение подопытных животных возбудителем туберкулеза ннутримышечно, внутривенно, интратестикулярно или аэрогенно, после чего наблю дают за животньпли н течение 3-5 мес. вплоть до их гибели с последующим их вскрытием, оценкой поражения внутренних органов, выделением мико- бактерий иэ органов и на основе этого заключением о вирулентности возбудителя Г 1 3Однако этот способ сложен и ха-. рактеризуется низкой оперативностью, исследования, что приводит к снижению эффективности противоэпидемических мероприятий и удлиняет .сроки лечения больных.Известен также способ определения вирулентности микобактерий, туберкулеза путем заражения морских свинок .культурой микобактерий под твердую оболочку головного мозга с последующим учетом поражения органон21.Однако известный способ опредеЛе- З ния вирулентности также характери- зуется большой сложностью и продол-, жительностью.выполнения, обусловленными большим количеством учитываемых ,параметров. 35 Цель изобретения - ускорение способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения нирулентности микобактерий туберкулеза, включающему заражение морских снинок культурой микобактерий под твердую оболочку головного мозга и последующий учет поражения органов, учитывают появление парали чей эадйих конечностей, и при появлении паралича до 19,2 дней после заражения определяют высокую степень вирулентности, на 19,3-24,1 день среднюю степень вирулентности и на . 50 24,2-30 день - слабую степень вирулентности.П р и м е р. Эаражение морских свинок весом 250-450 г производят в дозе 0,1 мг влажного веса. Суспензию культуры готовят путем тщательного растирания последней в ступке .при постепенном добавлении стерильного физиологического раствора, доводя взвесь до концентрации 1 мг/мл. 6 О Исследование каждого штамма проводят на четырех морских свинках примерно одинакового веса.Заражение животных осуществляют следующим образом, В области теменного бугра выше глазной впадины спрана от срединной линии черепа освобождают от волос кожу и выщипывают шерсть. Предварительно дав глубокий наркоз и обработав место операции спиртом, делают разрез кожи размером 1,0-1,5 см, отстоящий на 0,5 см вправо от срединной лйнии и на 3 см вверх от задней глазной линии, Кожную рану расширяют скальпелем, надкостницу разрезают и тщательно отпрепаровывают, затем высушивают стерильным тампоном. Справа от срединной плоскости, чтобы не повредить продольный венозный синус, с помощью конического фиссурного бора высверливают углубление, не проникая в полость черепа. Инфекци" онный материал н объеме 0,1 мл вводят непосредственно под тнердую обо лочку мозга. Для этого последнюю прокалывают в сделанном углублении иглой шприца и сразу, опустив шприц горизонтально, продвигают, иглу вбок на 1 см и наружу под оболочку и медленно нпрыскивают суспенэию. Иглу выводят иэ полости черепабыстрым движением, что предупреждает вытекание введенного материала. С целью предупреждения нытекания крони или ликвора отверстие в кости черепа на 5-10 с прижимают мягкими тканями. Края раны стягивают лигатурными шнами с помощью обычной хирургической иглы, которые затем смазывают йодом или клеолом. ее аее те ееВирулентность Средний срок появления параличей, дниЮВесьма высокая 17,0 ВысокаяСредняяСлабая 17,1-19 р 2 19,3-24,1 24,2-27,0 Не менее 27,1 Весьма слабая После заражения свинок помещают в клетку и один раэ н день оценивают их состояние. При появлении параличей задних конечностей пораженную параличем снинку извлекают из клетки и забивают путем создания ноэдуш" ной эмболии, зарегистрирован число дней от момента заражения до появления паралича, Если через месяц после заражения у всех или части свинок не развиваются параличи, их также забивают, считая, что Паралич развился на тридцатый день.Оценка степени нирулентности по средней геометрической срока появленин параличей представлена н таблице,%Составитель П. БонарцевРедактор Г. Безвершенко Техред:И.Метелева Корректор А. Повх Заказ 7 бб 4/24 Тираж 523 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное ФФилиал ППП "Патентф, г. ужгород, ул. Проектная 4 Использование предлагаемого способа в 3-5 раз по сравнению с анологами и в 2 раза по сравнению с прототипом позволяет сократить сроки наблюдения за подопытными животными и объемы исследований.