Способ приготовления гемолитической системы

Номер патента: 1028333

Авторы: Каральник, Кирющенко

ZIP архив

Текст

З(51) А 61 К 35/ ГОСЗЩАРСИб ДЕЛ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ активности комплементс антител путем обработк. зритроцитов гемолитиче отличающийс с целью повышения точн .деления активности ком вающих антител, взвесь эритроцитов центрифуги зовавшемуся осадку доб фрагменты гемолитическ до первоначального объ ную смесь инкубируют и течение 20-30 мин,отии О -я)евер ТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ А 8"ГОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54)(57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕМЙИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ для определени язывающих;бараньихкой .сывороткойтем, что, сти опре- лементсвязыобработанных уют, к обравляют Р авй сыворотки ма и полученри 35-37 С в1028333 Таблица 1 ической Титр РСК с антигеном клещевогоэнцефалита системы препарата Р ав фрагментов Температура, С Длительность,мин1:16-1:32 10 30 1:32-1:64 20 30 1:64 10 35 20 1:128 1:128 30 1:64 10 37 1;128 20 1:128 30 10 40 1:32 20 30. Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунодиагностике.Известен способ приготовления гемолитической системы для реакции связывания комплемента (РСК) путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической сывороткой 1 ).Однако известный способ не обеспечивает точное определение активности комплементсвязывающих анти тел.Целью изобретения является повышение точности определения активности комплементсвязывающих антител.Указанная цель достигается тем, 15 что согласно способу приготовления гемолитической системы путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической сывороткой взвесь обработанных эритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют Р ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и полученную смесь инкубируют при 35-37 Св течение 20-30 мин.П р и м е р 1. 5 мл гемолитической системы, предварительно приготовУсловия разработки гемолит ленной по известному способу, центрифугируют в течение 10 мин при 1 тыс, об/мин. Затем отсасывают 4,75 мл надосадка. К осадку прибавляют 4,75 мл гемолитической сыворотки, обработанной пепсином в присутствии 0,03 М солянокислого цистеина для фрагментирования антиэритроцитарных антител. В качестве препаратов Р ав фрагментов антиэритроцитарных антител можно применять Р(ав)1и Р(ав)2 чистых антител или глобулиновых фракций, выделенных из гемолитической сыворотки, а также фрагментированную перевариванием гемолитическую сыворотку, потерявшую литическую активность в отношенииэритроцитов в присутствии комплемента. Смесь выдерживают в течение 10, 20 и 30 мин при 30, 35, 37 и 40 С. С приготовленными пробами гемолитической системы исследуют сыворотку крови больного клещевым энцефалитом, в которой предварительно обнаружены антитела к бараньим эритроцитам в титре 1:64.Результаты опыта приведены в табл.1,1028333 ифугиы (5- опреде- нативкорости ой полой центмин. Использова рования гемол 10 мин при 1- ляется легкой ных зритроцит центрифугиров нотой их осажц рифугирование ный режим центр тической систем ,5 тыс.об/мин) повреждаемость в при большой ния и необходим ения, достигаем в течение 5-1 1615/1 1616/1 161 2/2 1621/1 1632/2:3 5повысить ности ко тр. :16 Составитель Г,КрюковаРедактор Л.Веселовская Техред Л. Пекарь К к тор А. Ильи одписное Заказ 4839/5 ВНИИ п 113013 комитета ССС и открытий ушская наб.,раж 7нноготений35, Ра Государстделам изоб Москва,4/5 Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул. Проектная Как видно из табл. , максимальная чувствительность РСК достигнутав тех случаях, когда гемолитическуюсыворотку обрабатывают препаратомР ав фрагментов антиэритроцитарныхантител в течение 20-30 мин при35-37 С (при других условиях обраоботки титр РСК более низок).П р и м е р 2. 10 мл гемолитической системы, предварительно приготовленной по известному способу,центрифугируют в течение 5 мин при1,5 тыс. об/мин. После этого отсасйвают 9,5 мл надосадка. К осадкуприбавляют 9,5 мл гемолитическойсыворотки, обработанной пепсином вприсутствии 0,03 М солянокислогоцистеина для фрагментирования антизритроцитарных антител. Смесь выдерживают в течение 30 мин при 37 ОС.С приготовленными по описанному иизвестному способам гемолитическимисистемами исследуют пять сыворотоккрови больных людей.Полученные результаты приведены в табл,2,Т б и ц а 2Таблица Как видно из табл.2, использование гемолитической системы, приготовленной по предложенному способу,обеспечивает более полное выявлениекЬмплементсвязывающих антител, чемпри использовании гемолитической системы, приготовленной по известномуспособу. Так, по известному способу антитела были выявлены в 4 из5 проб, а по предлагаемому - во всех5 пробах; при этом во всех случаяхтитр антител, определяемый с гемолитической системой, приготовленнойпо предлагаемому способу, в 2-4 иболее раз выше, чем с гемолитическойсистемой, приготовленной по извест"ному способу,Специфичность предлагаемого епособа подтверждается тем, что при постановке РСК с девятью различными антигенами в сыворотках крови больных выявляли антитела только к антигену возбудителя, вызвавшего данное заболевание, но не к другим антигенам. бразом, способ позволяеточность определения активлементсвязывающих антител.

Смотреть

Заявка

3364155, 17.12.1981

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ, МИКРОБИОЛОГИИ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

КАРАЛЬНИК БОРИС ВОЛЬФОВИЧ, КИРЮЩЕНКО ТАМАРА ВЛАДИМИРОВНА

МПК / Метки

МПК: A61K 35/16

Метки: гемолитической, приготовления, системы

Опубликовано: 15.07.1983

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1028333-sposob-prigotovleniya-gemoliticheskojj-sistemy.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ приготовления гемолитической системы</a>

Похожие патенты