Способ получения кристаллического инсулина

(71) Ордена Трудового Красного Знамени институт высокомолекулярных соединений АН СССР и ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени ленинградский завод медпрпаратов обьединения Ленмясппром(56) 1. Авторское свидетельство СССРЪ 389793 кл А 61 К 37/26 и 1976(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛИНА путем сорбцни инсулинсодержащего сырья, очищен- .ного от жиров и пигментов при рН 2,0- .4,0 на сульфокатионите, обработки сорбен. та уксусноаммонийным буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией, о т л и ч а ю щ и й с я тем,чю, с целью упрощения технологии получения целевого продукта и снижения егор- антигенности, сорбцию проводят на микродисперсии сульфокатионита с величинойчастиц 20-60 мкм, смешанной с инерт.ным силикатным наполнителем с величиной частиц 40-120 мкм при объемномсоотношении микродисперсяи и наполиителя (0,8-1,2):1, обработку смеси микродисперсии и паполнителя проводят 0,200,30 М уксусноаммонийным буфернымраствором при рН 5,2-6,4 и проводятдесорбцию 0,02-0,3 М буферным раст- авором при рН 6,4-7,6,2. Способ по и, 1, о т л ищ и й с я тем, что.в качественосителя используют стекло,ристое стекло, биогласс. чаюинертного щрк - С ОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРГЮ ДЕЛАМ ИЗОБ 1%ТЕНИЙ И ОТНРЬГПФ И АВТОРСКОМУ СВ 801007675 .1 10076Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касаетсяполучения лекарственных препаратов.Известен способ получения кристаллического инсулина путем сорбции инсулинсодержащего сырья, очищенного от жиров и пигментов, при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента уксусноаммонийным буферным раствором с последуюшей десорбцией и кристалли зацией ( 1.Однако способ требует использования в качестве исходного продукта уже очищенного кристаллического инсулина, выход конечного продукта составляет 40- 52% при содержании проинсулина 1% а технологический процесс сложен и длителен (84-170 часов) и не дает возможности получить целевой продукт со сниженной антигенностью. 26Цель изобретения - упрощение технологии получения целевого продукта и снижения его антигенности.Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа получения 2 кристаллического инсулина со сниженной антигенностью, путем сорбции инсулин- содержащего сырья, очищенного от жиров и пигментов при рН 2,0-4,0 на сульфокатионите, обработки сорбента З уксусноаммонийным буферным раствором с последующей десорбцией и кристаллизацией, сорбцию проводят на микродисперсии сульфокатионита с величиной частиц 20-60 мкм, смешанной с инертным силикатным наполнителем с величиной час" тиц 40-120. мкм при обьемном соотношении микродисперсии и наполнителя 0,8- 1,2:-1, обработку смеси микродисперсии и наполнителя проводят 0,20-0,30 М уксусноаммонийньм буферным раствором40 .при рН 5,2-6,4 и проводят десорбцию 0,02-0,3 М буферным раствором при рН 6,4-7,6.При этом, в качестве, инертного носителя используот стекло, широкопористое стекло, биогласс. П р и м е р 1. Через колонку диаметром 1,7 см и высотой 14 ем, заполненную 30 мл смеси микродисперсии суль- о фокатионита КУ20-60 мкм и биогласса 80-100 мкм в объемном соотношении 1:1, пропускают 50 мл раствора кристаллического инсулина с концентрацией 10 мг/мл ри рН=4,0. Сорбент И промывают 300 мл 0,3 М уксусноаммо"нийным буферным раствором с рН=-6,0. Десорбцию ведут 0,2 М фосфатным бу 75 2ферным раствором с рН 7,2. К собранному элюату в количестве 60 мл добавляют 1,4 г лимонной кислоты, 0,9 мл 5% раствора хлористого цинка и 20 мл ацетона, Раствор охлаждают и проводят кристаллизацию, постепенно добавляя 5 М соляную кислоту до рН=5,8. После кристаллизации получают 350 мг кристаллического цинк-инсулина. Биологические испытания показывают, что активность полученного препарата25,5 ед/мг. После очистки содержание проинсулина 0,5% и в 2 раза снижено количество аргинининсулина по сравнению с препаратом завода медпрепаратов.Сорбцию и промывку ведут со скоростью 350 мл/ч.смдесорбцию - со скоростью250 мл /ч см.П р и м е р 2. Через колонку диаметром 1,7 см и высотой 14 см, заполненную 30 мл смеси микродисперсиисульфокатионита КУ20-60 мкм иширокопористого стекла в обьемном соотношении 0,8-1, пропускают 200 млинсулинсодержащего раствора с рН== 2,0 (общая концентрация белков врастворе 7 кг/мл, около 20% от общего количества составляют инсулини его аналоги),полученного после десорбции с гранулированного сульфокатионитКУв процессе промышленной очист.ки инсулина, Сорбент промывают 250 мл0,3 М уксусноаммонийным буферным раствором с рН=6,4. Сорбцию и промывку ведут со скоростью 350 мл/ч см. Десорбцию ведут со скоростью 50 мл/и см0,02 М раствором ТРИС с рН=6,4 Ксобранному элюату в количестве 50 млпоследовательно добавляют 1,2 г лимонной кислоты, 0,4 мл 5% растворахлористого цинка, 10 мл ацетона. Раствор охлаждают и ведут кристаллизацию,постепенно добавляя 5 М соляную кислоту до рН=5,8, Выход целевого продукта 180 мг с активностью 26 5 ед/мг. Впрепарате именя лишь примеси дезамидоинсулина,П р и м е р 3, Через колонку диаметром 3,5 см и высотой 30 см, заполненную 250 мл смеси микродисперсии сульфокатионита КУ20-60 мкм и стекла 40-100 мкм в обьемном соотношении 1,2-1, пропускают 100 мл инсулинсодержащего раствора, полученного в ходе промышленной очистки инсулина.йосле десорбции с гранулированного ионита КУ. Сорбент промывают 0,2 М3 1007675 4уксусноаммонийным буферным раствором Предлагаемый способ позволяет уда с рН=5,2. Сорбцню и цромывк веду,лить проинсулин (не более 0,5%), актив-со екоростью 350 мл/ч АР.,де рб ность препаратов 25,5-26,5 ед/г. Споведут со скоростью 50 мл/ч см 2 0 3 М соб высокотехнологиченощц:ка не пре- . Раствором уксуснокислого аммония, свышает 8-10 ч.рН 7,6. К собранному элюату в количе- В способе исключаются стадии осаж стве 500 мл добавляют 7,2 г лимонной дения примесных белков при рН,0 и кислоты, 2,6 мл 5% раствора хлористого 4,4 и осаждение аморфного цинкинсулина цинка и 100 мл ацетона. Раствор охлаж-и дает возможность очистки любого пред- дают В ведут кристаллизацию, постепенно е варительно; очищенного от жира и пигмеи добавляя 5 Й соляную кислоту до рНМ 5,8. тов инсулинсодержащего раствора, В споПосле кристаллизации получено 940 мг собе находят применение отходы промышк,ристаллнческого цинк-инсулина с актив- ленного производства сульфокатионита ностью, 26 ед/мг. КУ,выпускаемого в массовоммасштабе, Составитель С. МалютинаРедактор Е. Лушникова Техред М,Коштура Корректор М. ШарошиЗаказ 2177/6 Тираж 711 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и отрыть113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5,Филиал ППП фПатентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4