Способ определения инсулина
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1030704
Авторы: Долманова, Метелица, Пиотровский, Цой
Текст
СОЮЗ СОЕЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 3(59 С 01 И 21/78 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТШИЙ И ОТКРЫТИЙ.научный центр Академии медицинскихнаук СССР и Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революциии ордена Трудового Красного Знаменигосударственный университетим. М,В. Ломоносова(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНСУЛИНАс использованием измерения оптической плотности раствора, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности способа, вводят пробу анализируемого вещества в раствор, содержащий гидрохинон и сульфат меди, к полученной смеси добавляют боратный буФерный раствор и перекись водорода с последующим измерениемизменения оптической плотности полученного раст вора.1 103Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамопределения лекарственного препарата - инсулина,Известен способ определения инсулина путем обработки анализируемоговещества сначала раствором нингидрина в метилцеллоэольве в присутствиицитратного буферного раствора, затемраствором цианида калия при нагревании до 100 С с последующим добавлением к полученному раствору этиловогоспирта и его Фотометрированием 1 1 .Недостаток данного способа состоит в его сложности, связанной с многостадийностью.Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности и достигаемым результатам является способ определения инсулина путем обработкираствора анализируемого веществащелочью и сульфатом меди с последующим измерением оптической плотностиполученного окрашенного соединенияС 2.)Недостатком известного способаявляется его низкая чувствительность( 0,5 г ) и неселективность, связанная.с тем, что определению мешают всебелки и полипептиды,Цель изобретения состоит в повышении чувствительности и селектив ности способа,Поставленная цель достигаетСятем что согласно способу определения инсулина, вводят пробу анализируемого вещества в раствор, содержащий гидрохинон и сульфат меди, кполученной смеси добавляют боратныйбуферный раствор и перекись водородас последующим измерением измененияоптической плотности полученногораствора,Способ определения инсулина влекарственных препаратах осуществляют следующим образом.Вводят аликвоты стандартного раствора в реакцию окисления гидрохинона перекисью водорода, каталиэируемую ионами Си 2, Определяют скорость этой реакции по изменению оптической плотности во времени, выражая ее как тангенс угла наклона прямой в коорди 0704натах оптическая плотность - времяИдсЦ), Используя полученные велицитны ( ОК)для разлицных аликвот стандартного раствора строят градуировоц-,ный график в координатах тангенс угла наклона - концентрация инсулина,по которому определяют содержание инсулина в исследуемых образцах. Приопределении содержания инсулина вО образцах лекарственных препаратовдля перорального, в цастности, сублингвального применения, необходимо припостроении градуировоцного графикавводить в реакционную Смесь аликвоту5 водного раствора плацебо", равнуюаликвоте водного раствора исследуемого образца, Время, затрачиваемоена анализ одного образца составляет5 мин. Метод позволяет определить20 не биологицеский эффект от введенияинсулина, а его колицественное содержание в водных растворах лекарствен"ных Форм,П р и м е р 1 , Определение со 25 держания инсулина в образце препаратадля перорального применения, По своемусоставу препарат, содержащий инсулин,и "плацебо" идентичны, эа исключением активного вещества, В качествестандарта используют коммерческийпрепарат (40 и.е./мл ),А, Построение градуировоцногографика,В спектрофотометрицескую кювету35(Й = 2 см ) вводят 0,7 мл водного раствора гидрохинона (0,23) 1,0 млводного раствора Со 50 б 1 О 5 М/;1,0 мл водного раствора"плацебо"(, пластинка в 25 мл ), боратныйбуферный раствор (рН = 7,8). до общего объема 1.0 мл, 0-40)мл стандартного раствора инсулина (40 и,е.//1 мл ); 0,3 мл концентрированнойНО. В момент введения Н 20 включа 45ют секундомер и измеряют значение оптической плотности на ФЭКМ (Ф Р 5)чеоез каждый 15 6 от 30 до 120 с,Каждый раз после проведения измерений кювету многократно промываютОбидистиллированной водой. Данные дляопределения содержания инсулина вобразце препарата для перораяьногоприменения даны в табл. 1.)й5 э фэ ц а э (о с о О О 2 а Ю СО 1 (Я, Ю СО СО СО л Ю(4 В Ю СО с а Ю Ю(Ч 1 1 11 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 1111 1 11 11 3 1 11 1 11 1 1 1 1 3 11 1 1 1 11 1 1 1 1 1 1 1 1 11 1 1 3 1 1311 1 1 1 3 131 11 31К эои Е У 1- хцо ээо хгх Э Е 1- и (- о асс кос 0 1 В 0 1 1 0л 0 1 303070 6Продолжение табл. 1 Фа М Мн Заданнаяконцентрация инсулина,0 0 08 1,6 Исследуемый образец и.е. в 10 мл реакционной смеси Значений оптической плотности (и = 3) Среднеезначениебарс х 10 72 6,6 Б 10 . 0 1 О 0,16 0,10 0,22 0,05- 10и(Г,М) " О,ч 0 0,25 0,13 На основании измерений велицин оптической плотности растворов строят прямую в координатах оптическая плотность - время и определяют изменение оптической плотности дА эа еди" ницу времени а 7 или, что тоже самое, тангенс угла наклона прямой 1 рсС В табл. 1 приведены значения 1 ф, приведенные в 1 мин (д ,= 60 с), как обычно принято в кинетических методах анализа, а также средние значения 1 дс полученные по результатам трех измерений, Градуировоцный график строят, откладывая по оси ординат значения Яс 1, а по оси абцисссоответствующие известные концентрации инсулина.Уравнение градуировоцной прямой 1 дох 10 = 7,14-1,16 Синс. Предел обнаружения - 0,26 ие/ /10 мл, что соответствует 6,5 и.е,/ /пл,6. Определение содержания инсулина в образце препарата для перорэльного применения. В спектрофотометрическую кювету( 0 = 2 см ) вводят 0,7 мл водного раствора гидрохинона 02 ; 1,0 мл водЗ 5 ного раствора СОЛО, ( 6 10 М ),1,0 мл водного раствора исследуемогообразца (1 пластинка в 25 мл ); боратный буферный раствор (рН = 7,.8) дообщего объема 10 мл; 03 мл концентрированной Н 02. В момент введенияН 02 включают секундомер и измеряютзйацения оптической плотнЬсти(табл. 1). Рассчитывают занчения1 сои определяют содержание инсулина в образце по полученному ранееградуированному рафику С= 12,5 и,е//пл.П р и м е р 2 . Определение содержания инсулина в коммерческом5 О препарате для инъекций с содержанием инсулина 40 и,е./мл, В качествестандарта использован кристаллицескийинсулин (25,2 и.е,),А, Построение градуировочногоЯ графика,В спектрофотометрическую кювету(О = 2 см )вводят 0,7 мп воднсгораствора гидрохинона (0,24); 0,2 мл7водного раствора Сы 50,1 (6 10 М);борэтный буферный раствор (рН = 7,81до общего объема 10 мл ( 0-100)млстандартного водного раствора инсу 1030704 8лина 5 и.е./мл, 03 мл концентрированной Н 0. Далее поступают, как описано в примере У 1.Значение оптической плотности и ф О приведены в табл.2.о со о.т а л СО СЧ СЛ,) 0 1 0 СЛ СО СО О 0 ОЪг сО фФ Ф СО О СЧ СЧ о - сЧ О СЧ СЧ о - сч сч мосл гТ о о сч мЗаказ 5202/44 Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035. Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5.филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 Предел обнаружения - О, 1 и,е./ /10 мл,Б, Определение инсулина в образце коммерческого препарата для инъекцииВ спектрофотометрическую кювету (1 = 2 см) вводят 0,7 мл водного раствора гидрохинона 0,2); 0 2 мл водного раствора САБО (6 10 М );70 мл водного раствора исследуемого образца инсулина, разбавленного в 10 раз, боратный буферный раствор 1 рН = 7,8 ) до общего объема 10 мл; 30704 120,3 мл концентрированной Н О. Вмомент введения Н О 2 включают секундомер и измеряют значение оптическойплотности на ФЭКИ через каждые5 с от 30 до 120 с. В табл. 2 представлены данные для определения содержания инсулина в коммерческом препарате для инъекций,Далее поступают, как описано в 10 примере 1. Содержание инсулина определяют по градуировочному графикуС х = 44 и.е,/1 мл исследуемого раствора С 0,31 и,е./10 мл ). 15 Предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность способа и его селективность,
СмотретьЗаявка
3364043, 01.12.1981
ВСЕСОЮЗНЫЙ КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР, МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА, ОРДЕНА ОКТЯБРЬСКОЙ РЕВОЛЮЦИИ И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М. В. ЛОМОНОСОВА
ЦОЙ ВЕРА ГЕННАДЬЕВНА, ПИОТРОВСКИЙ ВЛАДИМИР КОНСТАНТИНОВИЧ, МЕТЕЛИЦА ВЛАДИМИР ИСААКОВИЧ, ДОЛМАНОВА ИНГА ФЕДОРОВНА
МПК / Метки
МПК: G01N 21/78
Метки: инсулина
Опубликовано: 23.07.1983
Код ссылки
<a href="https://patents.su/7-1030704-sposob-opredeleniya-insulina.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения инсулина</a>
Предыдущий патент: Способ определения циркония
Следующий патент: Способ определения лигносульфонатов в буровых растворах
Случайный патент: Кресло машиниста