Штамм реniсilliuм сyсlорiuм wеsтl как биологический агент пулецидного действия

(19) (11) 1511 С 12 И 1/О 2 И ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕВАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 4Сорокина,ушкевичгосударствьский проти ельство СС4, 1974 анало(54) (57) ШТАММ РЕИ 1 С 11.1.1 ОМ СУС 1.0 Р 1 ЩцВИЕБТ 1 46 Р"157 КАК БИОЛОГИЧЕСКИЙ АГЕНТПУЛЕЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ (Всесснозныйнаучно-исследовательский институтгенетики и селекции микроорганизмовГлавного Управления МикробиологиЧеской проььиаленности при Совете Министров СССР) как биологический агентпулецидного действия.Изобретение относится к области микробиологии и касается получения нового штамма Реп 1 с 1111 цв сус 1 ор 1 цв ИеэС 1 патогенного для блох-переносчиков чумы.Известен штамм Веауег 1 а Ъаэз 1 апа (Ва 1 э) чц 111 113 Н, высоко вирулентный для блох СегаСарпу 11 цз Еаэс 1 Сцз Воэс 1Однако известный штамм обладает длительным циклом развития и низкой 10 продуктивностью.Целью изобретения является новый энтамопатогенный штамм гриба Реп 1- с 1111 цв сус 1 ор 1 цв ЮеэС 1, обладающий более высокой продуктивностью, 15 вирулентностью и более коротким циклом развития.Штамм Реп 1 с 1111 цв сус 1 ор 1 цв МеэС 1 выделен от блох СегаСорЬу 11 цз Сеэццогцв) и из субстрата нор малого суслика в природных очагах чумы, который затем пятикратно был пассирован через организм блох СегаСорйу 11 цэ Ьаэс 1 аСцэ с целЬю повышения продуктивности и вирулентности.Штамм Реп 1 с 1111 цв су цвР Агариэованная среда следующего состава: дистиллированная вода - 1000 мл, КН 2 РОФ -2 г, (Н а) 2 Я 04 " 1 г, Мд 504 - 1 г, глюкоза - 20 г, дрожжевой автолизат - 10 мл, пептон 10 г, агар - 20 г (РН,7). Колонии меньшего размера.физиолого-биохимические свойства.Усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу . Гидролизует крахмал .Усваивает альбумин, казеин. Добавление больших концентраций 3-5-ного пептона приводит к образованию Й-вариантов с низким спорообраэованием. Усваивает аммонийный азот. Разлагает липиды.Оптимум роста 26-28 С .Патогенные свойства. Вызывает 100 гибель бох. СегаСорЬу 1 цэ Еазс 1- аСцэ на 7-8 сутки.Таблица 1Динамика повышения вирулентностиРеп 1 с 111 цв сус 1 ор 1 цв ЮеэС 1 ХеэС 1 ьтураль- ичес.свой 3 епиаммсус 1 ор 1 Природный Р.Сус 1 ор 1 цЗ 5 пятикратно 10 сс Последов атеприродного шторганизм блохего вирулентнорезультате селрулентности по(Исходный штаммблох на 22 сутштамм на 7-8)Штамм Реп 1 сИезС 1 являетсяобладает болеевиТия и болеразованием,111 цв сус 1 ор 1 цввысоко вирулентным,коротким циклом раэнтенсивным спорообизвестный штамм. ече характеризуется следующими кулно-морфологическими и физиологкими и физиолого-биохимическимиствами.0Культурально-морфологически рзнаки.Лгаризованная среда сусло. Быстродействующие, плоские колонии с зернистой поверхностью, обильно спороносящие серо-голубого цвета, Конидиеносцы отходят от субстрата 200400 3 - 3,5 мкм, гладкие или слегка шероховатные, обычно с 1-2 веточками, 15-20 3 - 3,5 мкм, Метули 4010-12 205 - 3 по 3-5. Стеригмы обычно по 4-8 в пучке, 7-9 2 - 2,5 мкм.Конидии эллиптические, почти шаровидные 3,5-4 3 - 3,5 мкм. Диаметр.5-ти суточных колоний Р,сус 1 орцв 4518.9 мм,Агаэированная среда Сабуро, Плоские, круглые обильно спороносящие,прижатые к субстрату колонии сероголубого цвета,Агаризованная среда Чапека. Колонии 5)мелкие до 4 мм в диаметре на 5-е сут-ки роста, с нечеткими краями, серо"голубого цвета, спороносящие,ьное пассирование амма Р,сус 1 ор 1 цв через риводит к усилениють в 2 раза, а вктивного отбора виышается в 3 разавызывает 100 гибель и, полученный10054 б 2 Таблица 2 Вид гриба Диаметрколоний5-суточной культуры, мм Вес общегочисла конидий в 1 колоний, мг Количест- Вирулентво ь.и- ность Ко, дий в 1 мг/смь колонии. 4,1 10 0,44 13 10 18 б Р.сус 1 ор 1 цв 18,9В.Ьазз 1 апа 7 . 200 88 Техред А. Бабинец Корректор Л.Шеньо Редактор П.Горькова Заказ 4025/4 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного коветета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5филиал ППП фПатент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 П р и м е р 1. Штамм гриба Реп 1 с 1111 цв сус 1 ор 1 цв Ркульти- . вируют на плотной питательной среде (сусло-агар, рН 5,7) в условиях термостата при 26-28 С в течение 10 су; 20 ток. 10-суточную культуру высушивают в.открытых чашках Петри при температуре 30-31 ОС с применением гирогигроскопического вещества - плавленного хлористого кальция, до полного 25 обезвоживания питательной среды и образования массы порошковидных конидий (3-4 суток). Подсушенные конидии снимают с поверхности питательной среды и используют для зараже ния блох.Заражение осуществляют в биологических пробирках, куда помещают 3-5-суточных. блох СегайорИ 11 цз Еазс 1 айцз по 100 экэ в пробирку 35 и вносят навеску порошковидных конидий в количестве 100 мг. Пробирки с блохами и конидиями встряхивают для равномерного распределения конидиоспор по поверхности кутикулы насекомых. Обработанных конидиями блох помещают в кювету, после чего переносят экзгаустером по 10 экз, в биологические пробирки с полосками гофрированной фильтровальной бумаги. Пробирки с заражен ными блохами закрывают рыхлыми ватно-марлевыми пробками и помещают в термостат при температуре 22-23 и относительной влажности 80.-90. В аналогичных условиях содержат контрольных незараженных блох. Проводят ежедневный учет гибели экспериментапьных особей в опыте и контроле и пересчитывают результаты по формуле Аббота. При заражении блох СегайорЬу 11 цз Га.Й 1 айцз конидиями гриба Репос 11- 11 цв сус 1 ор 1 пв на 7-8 сутки отмечается 100 гибель экспериментальных особей, в то время как гибель Ь контроле составляет 7-24 в различных сериях опыта.П р и м е р 2. Блох СегайорЬу 1- 1 цз Газс 1 агцз (по 500 эксземппяров) помещают в биологические пробирки, содержащие в стерильном речном песке различные концентрации кониди Р.сус 1 ор 1 цв Р(1,2-мг/сму 0,3 мг/смр 0,15 мг/см). Пробирки с блохою содержат в условиях, приближенных к условиям микроклимата нор грызунов, температура воздуха 20-22 С, относительная влажность 80-90), Контрольные блохи находятся на стерильном речном песке без конидий. Гибель блох происходит под влиянием всех, взятых в опыт концентраций конидий Р.сус 1 ор 1 цв Р58. Сроки 90 гибели блох зависят от концентрации конидий Р.Сус 1 ор 1 цв Рв субстрате и составляют от 9 до 12,2 суток. Для достижения такого .же эффекта от Веацчег 1 а Ьазз 1 апа требуется концентрация конидий в 8 и более раз щ 3 евышакщай минимальную концентрацию (0,15 мг/смз) штамма Р.сус 1 ор 1 цв Р. Естественная смертность в контрольных вариантах опыта составля-ет от 2 до 20.Использование изобретения позво- лит повысить эффективность борьбы с переносчиками чума.