Штамм гриба реniсilliuм снrysоgеnuм тном, используемый в качестве биологического агента пулецидного действия

(5 Ы 1/00//(С 12 Ы 1/О 12 К 1:82) РЕТЕНИЯ ПИСАНИЕ ГОСУДАРСТНЕННЪЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЪТ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Авторское свидетельство СССР В 1005468, кл. С 12 М 1/00, 1981.Авторское свидетельство СССР Р 1005463, кл. С 12 И 1/00, 1981. (54) ШТАММ ГРИБА РЕИТСП,1,ПЗМ СНК 1 БОСЕМПМ ТНОМ, ИСПОЛЬЗУЕМЬПЗ В КАЧЕСТВЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТА ПУЛЕЩДНОГО ДЕЙСТВИЯ(57) Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к получению биологического продукта, патогенного для блох - переносчиков чумы. Целью изобретения является штамм гриба Репхс 11 шш сЬгузояепцш ТЬош, обладающий повышенной вирулентностью, продуктивностью. Штамм гриба Репдсг 11 дцш сйгузояепцш Трош 18 депонирован в коллекции института ВНИИгенетика под номером Р. Штамм получен селекцией с применением нитрозометилмочевины из естественной популяции штамма. Штамм культивируют на плотной питательной среде (сусло-. - агар, рН 5,7) при температуре 28 С в течение 10 сут, Конидии гриба Р.сЬгузояепцш ВКПМ 0341 вызывают 1007-ную гибель блок Хепорзу 11 а зК 1 аЬ 1 п 1 на 5-7 сут после заражения. Я Высокая продуктивность, вирулентность для переносчиков чумы позволяют использоватьштамм в качестве биологи- ею ческого агента инсектицидного дейст- ф вия. 3 табл.Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению биологического продукта, патогенного для блох - переносчиков чумы.Целью изобретения является получение штамма Реп 1 с 11.1.цщ сЬгуяояепцщТЬощ 18, обладающего повышенной вирулентностью.Штамм Репгс 1111 цщ сЬгуяояепцщТЬощ 18 выделен из субстрата норколоний большой песчанки в природном очаге чумы и селекционирован с применением метода индуцированного мутаге"неза, 15Штамм Реп 1 с 111 гцщ сЬгуяоеепцщ ТЬощ18 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов(ВНИИГенетика) за номером Р,Штамм Реп 1 с 1111 цщ сйгуяодепцщТЬощ ВКПМ ИРхарактеризуетсяследующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими свойствами.Культурально -морфологическое свой ства. Рост на агаризованной средесусло,Плоские, быстро растущие колониисалатного цвета с белым ободком иприподнятым центром, обильно спороносящие. Достигают максимальной величины (20 мм) к 10 дню культивирования. Кисточки типично двухъярусныеи асимметрические. Конидиеносцы отходят большей частью от субстратаили от базального войлочного спле 35тения мицелия, обычно на расстояние130-180 х 2,5-3,2 мкм, более или менее гладкие, Метули в верхушечноймутовке, по 4-5 иногда по 8, разныепо длине, 12,5-18,7 х 2,5-3,4 мкм,несущие по 5-8 стеригм с типичноострой верхушкой. Конидии эллиптической формы 2,5-3,4 х 2-2,6 мкм,поверхность вирулентных конидий покрыта выростами остроконечной формы.Рост на агаризованной среде Чапека.Светло-зеленые, плоские, мелкиеколонии с белым ободком, диаметр 10 суточных колоний 7-10 мм.Рост на агаризованной среде Чапе 50ка с 57 дроженого экстракта.Серо-зеленые колонии с белым ободком и каплями желтого пигмента. Диаметр 10-суточных колоний 15-20 мм.Рост на агаризованной среде Чапека с 17. крахмала.Ярко-зеленые мелкие колонии с кап"лями желтого пигмента. Физиолого-биохимические свойства. Усваивает сахарозу, глюкозу, мальтозу, гидролизует, крахмал, Усваивает альбумин, казеин, аммонийный азот, нитраты, Разлагает желатину, липиды.0 Температурный оптимум 28 С, рН 5,7- 6,0Патогенные свойства. Вызывает 1003-ную гибель блох Х.яЕаЬ 1 пг на 5-7 сутки.Динамика повышения нирулентности гриба Реп 1 с 111 дцщ сЬгуяооепцщ ТЬощ ВКПМ 9 Рв процессе селекции показана в табл, 1.П р и м е р 1, Штамм грибаР.с 1 гуяодепцщ ВКПМ Ркультивируют на плотной питательной среде (сусло-агар, рН 5,7) при 28 С в течение10 сут. Конидии гриба стерильнымшпателем отделяют от поверхностипитательной среды без нысушиванияпосевов, что значительно экономитвремя и уменьшает трудоныг затратына получение .биомассы, Заражениеблох Х.яЕ 1 аЬп 1 конидиями гриба осуществляют в биологических пробирках,куда помещают 3-5-суточных блох по100 экземпляров и вносят нанеску порошковидных конидий в количестве100 мг. Пробирки с зараженными блохами встряхивают для равномерногораспределения конидий по поверхностиих кутикулы, Обработанных насекомыхпомещают н кюветы, после чего переносят экзгаустером по 10 экземпляровв пробирки с полосками гофрированнойфильтровальной бумаги, Пробирки закрывают рыхлыми ватно-марлевыми пробками и помещаот в термостат при 22 о23 С и относительной нлажности 80902,В аналогичных условиях содержатконтрольных незараженных насекомых,Учет гибели блох н опыте и контролепроводят ежедневно. Вирулентностьштамма оценивают по 50 и 100 Х-нойгибели экспериментальных особей.Результаты опытон представленыв табл. 2,П р и м е р 2. Блох Х.яаЬ 1 п 1(по 500 экземпляров) помещают н биологические пробирки, содержащие нстерильном речном песке различныеконцентрации конидий Р.сЬгуяо 8 епцщР(5; 2,5; 1.2; 0,6; 0,3 мг/см).Пробирки с блохами содержат в условиях, приближенных к условиям микроклимата нор грызунов (температура3 14425 воздуха 20-22 С, относительная влажность 80-90 Х), Контрольные блохи находятся на стерильном речном песке, не содержащем конидий. Вирулентность5 конидий оценивают процентом гибели блох на 5 сут после заражения.Результаты опытов приведены в табл. 3.Таким образом, штамм Р.сйгуяояепцв 10 ВКПМ Гобразует конидии, легко отделяющиеся от питательной среды, обладает высокой вирулентностью,продуктивностью, более короткими сроками культивирования, 15 43 Таблица 1 Время гибели блох,сут Штамм ЬТ 50 1,Т 100 Исходный вирулентный селекционированный 16 19 Клон из исходной популяции 8 10 Формула изобретения Штамм гриба Репдс 1111 цв сйгуяоеепцш ТЬогп ВКПМ у Риспользуемый в качестве биологического агента пулецидного действия. Индуцированныйнитрозометилмочевинойштамм Р5-7 Т а б л и ц а 2 Вирулентность1.Т 100 сут Вес конидийв колонии,мг Диаметр 10 суточных колоний, мм Вид гриба Р.сйгуяое-.пцш Г5-7 280 19,0 Р . Гцп 3.сц 1 оящп Г8-9 127 17,3 Таблица 3 Гибель блох на 5- сут.Ж . Концентрацияконидий в Р.сйгуяо- Р,1 цпсц 1 оеепцтп яцв РРстерильном речном песке, мг/смз 67 37 62 1,2 16 36 0,6 36 12 0,3 Контроль