Штамм 451-50-продуцент гиалуронидазы

0 П И С А Н И Е (и 1 563433ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистических Республик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.09,75 (21) 2173773/1 аявкп М п исоединением Государственный комнтСовета Министров СССР(53) УДК 615.779.9033.8) по делам изобретений О "УыР 1 комю юллетень М 24 0,06.77 открыт та опубликования описания 20.10,77Изобретение относится кчастности к производству фратов.Известен штапродуцент гиалОднако для эсокая активносЦель изобресобный продуцдазу.Для го используют шачагп 1 - 5,0. микробиолэгии,ерментных прана ажагпоп 22 мм Азрегр 11 пуронидазы,того штаммать продуциртения - полуировать акти ерна невы- фермента. тамм, опо- гиалурониарак емого ть ш ную зрегр 11 ц Штамм Азрегр 11 цз ачагпоп 451 - 50 получен в результате многоступенчатой селекции. Способы, ведущие к получению этото активного штамма, состояли в подготовке и отборе лучшего варианта для проведения селекционных исследований. Отобранный более активный вариант Азрегр 111 из аюагпоп 224 - 21, полученный .на третьей ступени селекции, подвергали четырехкратному воздействию химическо;о мутагена - этиленимина концентрацией 1: 4000 при экспозиции 30 мин в сочетании с ультрафиолетовыми лучами в дозе 25 10 эрг/мм. Выделенный при четырехкратном комбинированном воздействии этиленимина и ультрафиолетовых лучей и многоступенчатом отборе новый активный штамм 451 - 50 подвепгали проверке по ферментативной активности в процессе хранения и пассированпя насусло-агаре.Штамм Азрегр 1 цв агагпоп 451 - 50 хранится в коллекции культур ВНИИ генетики п сс лекции промышленных микроорганизмов подномером Ги характеризуется следующими признаками.Морфологические признаки.На сусло-агаре мпцелий сильно разветвлен.0 Стенки клеток мпцелпя извилистые, около перегородок часто наблюдается утолщение стенок. Ширина клеток мпцелия зарьпрует от 2,3 до 4,75 мк, длина - от 15,0 до 50 мк. Конпдпеносцы извитые, коричневые, без перегородок, 5 ширина конпдиеносцев достигает 6,25 -11,25 мк. Конидии круглые, с,гладкой ооолочкой, светло-коричневые, диаметр их составляет 2,75 - 5,0 мк.Культур а льны е при зн акп.20 Сусло-агар. Колонии круглые, выпуклые,пушистые, с глубокой радиальной складчато- стью. Конидпеобразование обильное. Диаметр ги 1 гантских колоний на шестые сутки роста достигает 67 - 72 мм.25 Агаризованная среда Чапека с 6% крахмалаи 10%-ным экстрактом из солодов 1 х ростков, Колонии неправильной круглой форин, бархатистые, темно-бежевого цвета с коротким воздушным мпцелпсм и резко выраженной ра диальной волнистой складчатостью па верхНПО Заказ 1680/7 Изд. ЛЪ 574 Тираж 563 Подписное Сапунова, 2 Типография, пр. ней и никней поверхностях. Периферическая часть белая, широкая. Диаметр колоний на шестые сутки роста достигает 58 - 65 мм, края крупнозубчатые.Ломтики картофеля. Рост хороший, бархатистый, с глубокой складчатостью, конидиеобразование обильное. Цвет колоний темно-бежевый, Окраску субстрата не изменяет.Биохимические свойства.Мясо-пептонную желатину разжижает. Молоко свертывает и пептонизирует, Пигмент в молоко не выделяет.Нитраты восстанавливает.Крахмал гидролизует.Отношение к углеводам.Глюкозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу тидролизует с образованием щелочи; талактозу, лактозу тидролизует с образованием кислоты,Глицерин, маннит гидролизует с образованием кислоты.Газообразование отсутствует.Культивирование мутанного штамма проводят в глубинных условиях на жидкой среде Чапека, содержащей, % .Натрий азотнокислый 0,9 Калий хлористый 0,05 Магний сернокислый 0,05 Калий фосфорнокислыйоднозамещенный)Келезо сернокнслоеКрахмал растворимый10-ный водный экстрактиз солодовых ростков, мл 10Рост штамма Азрегр 11 цз ачагпог 1 451 - 50 на указанной среде при глубинном способе культивирования в колбах на качалке при 180 об/мин и 30 С очень интенсивный, имеет вид мелкозернистой, густой, кашицеобразной массы.Максимальное образование гиалуронидазы в культуральной жидкости наблюдается после 72 час выращивания; активность гиалуронидазы, определяемой методом Систона Касса, составляет 11 - 12 ед/мл. В культуральной жидкости кроме гиалуронидазы имеет место также накопление глюкоамилазы, мальтазы,Показатели активности глюкоамнлазы равны 18 - 20 ед/мл, мальтазы - 2,30 - 2,50 ед/мл.Прп хранении и нассировании высокий уровень ферментативной активности штамма Азрегр 11 цз агаптог 1 451 - 50 не снижается. Г 1 овышенная продуцирующая способность штамма 451 - 50,проявляется,при выделении препарата ферментов пз глубинной культуры трехсуточного возраста. Препарат гиалуронидазы получа.ог путем осаждения фильтрата культуральной жидкости четырьмя объемами этпоного спирта при температуре смеси 2 - 4 С. Фермснтный препарат отделяют цснтрифугцрованием, затем промывают спиртом, сушат. В высушенном и измельченном до порошкообразного состояния препарате опреде 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ляют активность гиалуронидазы и сопутствующих ферментов, Выделенный препарат имеет следующие показатели активности: гиалуронидазы 500 ед/мг, глюкомилазы 1850 - 2000 ед/г, мальтазы - 16,5 - 18,0 ед/г,Мутант 451 - 50 обладает большими преимуществами, состоящими в усиленной способности к биосинтезу,гиалуронидазы и сопутствующих ферментов амилолитического комплекса - тлюкоамилазы, мальтазы. Совместное действие перечисленных ферментов обеспечивает гидролиз мукололисахаридов. Формула изобретенияШтамм Азрегф 11 цз аъчагпог 1 451-50 - продуцент гиалуронидазы, хранится в коллекции культур ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером Г.Морфолотические признаки.На сусло-агаре мицелий сильно,разветвлен. Стенки клеток мицелия извилистые, около перегородок часто наблюдается утолщение стенок, ширина клеток мицелия варьирует от 2,3 до 4,75 мк, длина 15 - 50 мк. Конидиеносцы извитые, коричневые, ширина достигает 6,25 - 11,25 мк. Конидии кру 1 глые, с тладкой оболочкой, светло-коричневые, диаметром 2,75 - 50 мк,Культуральные признаки.Сусло-агар. Колонии круглые, выпуклые, пушистые, с)глубокой радиальной складчатостью. Конидиеобр азование обильное.Диаметр гигантских колоний на шестые сутки, роста достигает 67 - 72,мм,Агаризованная среда Чапека с 6% крах,мала и 10-ным экстрактом из солодовых ростков, Колонии неправильной круглой формы, бархатистые, темно-бежевого цвета с коротким воздушным мицелием и резко выраженной радиальной волнистой складчатостью на верхней и нижней поверхностях. Периферическая часть белая, широкая. Диаметр колоний на шестые сутки роста достигает 58 - 65 мм, края крупнозубчатыс.Ломтики картофеля. Рост хороший, бархатистый, с 1 глубокой складчатостью. Конидиезбразование обильное. Цвет колоний темно-бежевый. Окраску субстрата не изменяет.Биохимические свойства.Мясо-,пептонную желатину разжижает. Молоко свертывает и пвптонизирует. Пигмент в молоко не выделяет.Нитраты восстанавливает. Крахмал тидролизует.Отношение к углеводам.Глюкозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу,гидролизует с образованием щелочи; галактозу, лактозу гидролизует с образованием кислоты.Глицерин, маннит гидролизует с образованием кислоты.Газообразование отсутствует.