Способ получения препарата глюкоамилазы

(71) Заявитель Московский ордена Трудового Красного Знамени институт пищевой промышленности(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГЛЮКОАМИЛАЗЫ 1 О Изобретение относится к мнкробиологичебкой промышленности, а именно к производству ферментных препаратов.Известен способ получения высоленногопрепарата глюкоамилазы, предусматривающийконцентрирование культуральной жидкостивымораживанием и последующсе высаливаниефермента сульфатом аммония 13.Однако этот способ включает энергоемкийи малопроизводительный процесс вымораживания (на 1 ккал холода затрачивается энергиязначительно больше, чем на 1 ккал тепла),требующий специального уникального оборудования,Наиболее близким к предлагаемому явля.3 ется способ получения препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культу- ральной жидкости вакуум-выпариванием и по. следующее высаливание фермента сульфатом30 аммония илн спиртом. Активность глюкоами.лазы, полученной после 12 - 15 ч культивирования продуцента - Еа 3 оеусорЫе НЬв 11 цег, составляет 8120 ед (21 Недостатком известного способа являетсязначительная потеря активности фермента впроцессе вакуум- концентрирования,Цель изобретения - снижение потерь активности, а такжеполучение более очищенногопрепарата,Поставленная цель достигается тем, что вспособе получения препарата глюкоамилазы,предусматривающем концентрирование куль.туральной жидкости вакуум-выпариванием ипоследующее высалнвание фермента сульфатомамонин, процесс высалнвания осуществляютв две стадии, причем первую проводят в про.цессе вакуум. концентрирования путем введенияв фильтрет культуральной жидкости сульфатааммония в количестве 5 - 15% от. насыщения,после чего определяют выпавший осадок и про.водят вторую стадию введением остального количества сульфата аммония до 60 - 65% от насыщения,Сущность способа в том, что дрожжеподобный микроорганизм Еодотусора 1 в арес 1 ее 20 - 9выращивают глубинным способом, после чегокультурапьиую жидкость отделяют от биомассы.908796 Составитель Е. ВоробьеваТехред Э.фечо Редактор Е. Дичинская Корректор Г. ОгарПодписное Заказ 749/27 Тираж 505:ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений н открытий113035, Москва, Ж.З 5, Раушская наб д. 4/5 Филяал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3В фильтрат культуральной жидкости вносят 5 - 15% от насыщения сульфатагаммония, раствор концентрируют методом вакуум-выпарива. ния при повышенной температуре.Концентрат культуральной жидкости после выпаривания, содержащий 25 - 30% от пасы. щения сульфата аммония, охлаждают до 5 - 10 фС и вносят дополнительно, если необходи. мо сульфат аммония до 30% от насыщения, вьтдеуживают 1 - 5 ч и отделяют осадок, содер жащий балластные вещества и остатки гликозилтрансфераэы, К центрифугату добавляют сульфат аммония до 60% от насыщения, по. лученный осадок отделяют центрифугированием, высушивают в вакуум. сушильном шкафу и на распылительной сушилке.П р и м е р, Дрожжеподобньй организм Ев 1 отпусорза арестова 20 - 9 выращивают в 20 л ферментере, содержащем 10 л оптимальной питательной среды следующего состава, %: кукурузный экстракт 3,0; кукурузная мука 1,5; олеиновая кислота 0,2; рН среды 4,0 Время стерилизации 1 ч при 120 С,.Длительность культивирования 32 - 36 ч при величине аэрации 1 лб/лч и перемешивая 180 - 220 об/мин, По окончании выращивания культуральную жидкость с глюкоамилазной ак. тивностью 10 ед/мл отделяли отбиомассы сепариров ание м.В фильтрат культуральной жидкости вносят сульфат аммония в количестве 15% от насыщения при постоянном перемешивании и смесь подают на вакуум-выпарную установку. Температура выпаривания 36 фС, степень концетприрования 2, Получают 4,5 концентрата с глю 35 коамилазиой активностью 38,3 е 4 мл, Ъыхад 95,7% с содержанием сульфата аммония 30% от насьпцения, Полученный концентрат охлажда. 4ют до 10 - 15 С, выдерживают 1-2 ч и выпавший осадок отделяют сепарировзнием. В фильтрат 4,1 л с глюкоамилазной активностью 37,1 ед/мл вносят при непрерывном перемешивании необходимое количество сульфата аммония до 60% от насыщения, смесь выдержива. ют 5 - 10 ч, Выпавший осадок отделяли сейарнрованием, высушивают в вакуум-сушильномшкафу, Выход препарата 32 г с глюкоамилаз. ной активностью 2878 ед/мл,Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность глюкоамилазы и получить более очищенный препарат. Формула изобретения Способ получения препарата глюкоамилазы,предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вакууьевыпариванием ипоследующее высаливание фермента сульфатомаммония, о т л и ч а ю щ и й с я. тем, что,с целью снижения потерь активности, а такжеполучения более очищенного препарата, Ьро.цесс высаливания осуществляют в две стадии,причем первую проводят в процессе вакуум.концентрирования путем введения в фильтраткультуральной жидкости сульфата аммония вколичестве 5 - 15% от насьпцения, после чегоотделяют выпавший осадок и проводят. вторуюстадию введениеьт остального количества суль.фата аммония до 60 - 65% от насьпцения.Источники информацтпт,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР У 402541,кл, С 12 О 13/10, 1973.2, Авторское свидетельство СССР Иф 340690кл. С 12 О 13/10, 1970 (прототип).