Способ количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях

Оп ИСАНИЕ ЙЗОБРЕТЕпИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ВТИЗЬСТВУСвез Советскик Социапнстическиа Республик(22) Заявлен с присоедине нием зая ГосударствеииыВ ком СССР по делам изобретеи и открытиВ23) Приоритет убликоваио 3 081. Бю я описан летень Й 9 40Я 30.10.81 3)У 611.39 (088.8 Дата о ован Г.Е.Добрецов, В.А.Полесскийи Ю.А.Владимиров 2) Ав изоб В.Е.формаз е московский ордена Ленина государстский институт им, Н,И.Пирогова ый(71 Заяв лоуресценлине волныределяютпо формуле и возбуждении ф до 420 нм при д 460-530 нм и оп ю липопротенда аствории отспускаонцент к медицине, ественногов биологи- стической Изобретение относитсяа именно к способам количопределения липопротеидовческих жидкостях с диагноцелью.Известен способ. количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях путем выделения липопротеидов с последующей обработкой их химическими реактивами 1 1.Однако известный способ сложен и трудоемок, требует сложной аппаратуры и не обеспечивает надежных результатов из-за низкой чувствительности.Бель изобретения - повышение чув ствительности способа и упрощение АД В 1 Р ипопротеидавора;осфолипидовлассе липоп де С - количество мг/1 мм ра Д - содержание конкретноме та в инте 1-ан ель достигается тем, твлении способа колиределения липопротеиеских жидкостях путем протеидов с, последуюих химическими реактиеиды последовательно ,01-0,15 молярным трис -15-ным раствором хлои 0,1-0,5. раствора нный раствор вводят нилинонафталин-сульят флуориметрирование ла;коэффиц тенсивн раствор 8-сульф фосфолн ини ент зависимостисти флуоресценци1-анилинонафталната от концентридов . и 25 37 ищи лучен- элемен- льного 1. У донорач после приема я анализа. Из п ждения клеточных одом последоват Примелет, через 12берут кровь дной после осатов плазмы ме егоУказанная ц что при осущес чественного оп дов в биологнч выделения липс щей обработкой вами, липопрот обрабатывают 0 НС 1 буфером, 5 ристого натрия ЭДТА, в получе 10-100 мкм 1-а фоната, провод 4) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ877437 Формула изобретения Способ количественного определения липопротеидов в биологическихжидкостях путем выделения липопротеидов с последующей обработкой их химическими реактивами, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа и упрощения его, липопротеиды последовательно обрабатываЮт 0,01-0,15 молярнымтрисНС 1 буфером, 5-15-ным раствором хлористого натрия и 0,1-0,5раствора ЭДТА, в полученный растворвводят 10-100 мкм. 1-анилинонафталин 8-сульфоната, проводят Флуориметриро- ЗО вание раствора при возбуждении Флуо-"ресценции от 340 до 420 нм при длиневолны испускания 460-530 нм и определяют концентрацию липопротеида поФормуле35 А ф ДСВР. где С40 50 55Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Руководство по клиническим лабораторным методам исследований, Подщ 0 ред. Смирновой и кост, м 1964,с, 223,ВНИИПИ Заказ 9605/68 Тираж 910 Подписное Филиал ППП Патент, г.ужгород,ул,Проектная,4 ультрацентрифугирования выделяют липопротеиды высокой и низкой плотности, По предлагаемому методу Определяют кОнцентрацию липоцротеидов Для этого выделенные липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трис. НС 1, добавляют 5 хлористого натрия, 0,1 этилендиаминтетраацетата и раствор .1-анилинонафталин-сульфоната до конечной концентрации 50 мкМ. Измеряют флуоресценцию полученного раство- ра при 480 нм и возбуждении при 365 нм. Полученное значение интенсивности Флуоресценции делят на интенсивность Флуоресценции 1-анилинонафталин-сульфоната в 35-ном зтаноле, умножают на процентное содержание 1 Фосфолипидов в данном классе липопротеида и делят на коэффициент Р. Время анализа 5 мин, объем плазмы дляопределения концентрации липопротеидов 7 мкл. Концентрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у донора В. равны 225 м 2 и 250 мг соответственно.П р и м е р 2, У пациента К., 48 лет, который страдал атеросклерозом коронарных артерий, что клинически проявлялось в приступах стенокардии, специфических изменениях ЭКГ, брали кровь из кубительной вены. Выделенныепоследовательным ультрацентрифугированием липопротеиды высокой и низкой плотности растворами в 0,15 молярном трис НС 1, добавляют 15 хлористого натрия и 0,5 этилендиамининтетраацетата. В полученный раствор вводят 10 мкМ 1-анилинонафталин-сульфоната и проводят Флуоро- метрирование раствора при 400 км (при возбуждении 340. нм). Концентрацию липопротеидов определяют также как В примере 1. Объем используемой плазмы 5 мкл, время анализа 5 мин. Концентрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у пациента К. равны 180 мг и 350 мгсоответственно.П р и м е р 3. У. кролика-самца породы Шиншилла весом 2,5 кг вызывали экспериментальный атеросклероз скармливанием холестерина из расчета 0,2 г/1 кг веса животного. Через 4 мес кормления кролика забивают, из крови выделяют липопротеиды высокой и низкой плотности последовательным ультрацентрифугированием. Липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трисНС 1, добавляют 5 хлористого натрия, 0,1 этилендиаминтетраацетата и раствор 1-анилинонафхалин"сульфоната ДО КОНЕЧНОЙ КОНЦЕНтраЦИИ 100 мкМ. Далее проводят Флуорометрирование полученного раотвОра при 530 нм и возбуждении при 420 нм. Осуществляют расчет концентрации липопротеидов аналогично примеру 1. Время анализа .5 мин, объем плазмы 6 мкл. Содержание липопротеидов низкой и высокой плотности у кролика с алиментарной гиперхолестеринемией равно 735 мги 123 мгсоответственно.Предлагаемый способ обладает большой чувствительностью, что повышает точность и информативность полученных результатов, при этом способ прост и экономичен и не требует деФицитных и дорогих химических реактивов и сложной аппаратуры. количество липопротеида,мг/1 мм раствора;содержание Фосфолипидов вконкретном классе липопротеида;интенсивность флуоресценции1-анилинонафталин-сульфоната в растворе липбпротеида;интенсивность флуоресценции1-анилинонафталин-сульфоната в 35-ном растворе этанола;коэффициент зависимости интенсивности Флуоресценциираствора 1-анилинонафталин 8-сульфоната от концентрации Фосфолипидов.