Способ обработки пленочных фильтровальных материалов

ОП ИСАЙИЕИЗОВРЕТИН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДИТВЛЬСТВУ Союз СоввнимиСоциелэте тически кРеспублик(51)М. Кл.011/28 ВВудеретеэиньй кемитет ССС.Р ие аелэи изобретений и вткрцтийУкийВсесоюзщий научно-исследовательский и ко институт медицинской лабораторной техник 71) Заявите СОВ ОБРАБОТКИ ПЧЕНОЧНБХ ФИЛЬТРОВАЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ го Наи а, упрощениаботки,Изобретение относится к области микробиологии и иммунологии.Известен способ иммунолюМинесцентиого исследования микробиологических объектов, например, с целью их идентификации, согласно которому исследуемые препараты наносят на предметные стекла и после Фиксации окрашивают специфическими люминесцентными сыво" ротками 11,Однако использование стекол требу 0 ет специальвой обработки их до и после исследования, они обладают новьиненной хрупкостью и легко бьются.Для исследования микробиологичест% ких объектов используют пленочные фильтровальные материалы, применение которых ие требует обработки до и после применения, ие нужна постоянная перефокусировка микроскопа из"за маЮ ло допуска по толщине пленки.более близким по технической сущности и достигаемому эффекту предлагаемому является способ обработки пленочных фильтровальных материалов, заключающийся в окрашивании ипоследующем просушивании пленочйыхматериалов 1.21.Недостатками способа является то,что коричневый фон фильтра недостаточно контрастен с окраиеитеиж иммунофлуоресцентныме сывороткаьж в желто-зеленый цвет микрообъектамн. Этозатрудняет процесс исследования подмикроскопом. Кроме того, контрастностьнарушают зеленоватые очертания ячеекматериалаостаточная люминесценция.Способ обработки материала достаточно трудоемкий и длительтетй, Для егоосуществления необходимо кипячениематериала до окраски и многократноекипячение с целью промывки после окрас"килеиян. В процессе обработкн требу-ется непрерывное внимание лаборантав течение 15 ч,Цель изобретения - увеличение контрастности фона материал еи сокращение времени обр6449 ВНИИПИ Заказ 8066(66 Тираж 910 Подписное 3 86Поставленная цель достигается тем,что в способе, заключающемся в окрашивании и последующем просушиванииперед окрашиванием, пленочный фильтравальный материал погружают в глицерин до полного просветления, подсушивают и помещают при комнатной температуре на 2-3 мин в черную тушь, затем высушивают до полного высыхания.Предлагаемый способ осуществляетсяследующим образом,Пленочный фильтровальный материал,в частности ацетилцеллюлозную пленку типа "Владипор", опускают в глицерин и выдерживают в нем до пол-,ного просветления пленки, По времениэта процедура занимает около 1 ч. Затем дают стечь глицерину и подсушивают на воздухе не обязательно дополногг высыхания. После чего пленкупогружают в черную тушь до полученияравномерного пропитывания пленки, Всреднем на эту процедуру уходит2-3 мин, Окрашенную пленку высушиваютна воздухе или для ускорения в термостате. Обработанные таким образомфильтры становятся более эластичны"ми, их можно хранить в виде полосили накрученными на бобинах и по мере надобности использовать, Были проведены многочисленные исследования повыбору пленки, дающей наибольший положительный результат, Окраске подвергались пленочные Фильтровальные материалы:"Владипор" ИФА-МА из ацетилцеллюлозы, "Хемофилн ПВХ на основе поливинилхлорида, "Хемофил" СПА на основе алифатического полиамида и Фенилонна основе полифеииленизофталамида,С окрашенными по предлагаемому способу фильтрами были проведены испытания с использованием различных видов бактерий. Взвесь бактерий илиисследуемый жидкий материал выдерживают в течение 15 мин в пробирке симмунной люминесцирующей сывороткой,взятой в двойном титре, и равном споследуемой пробой объеме. Затемкаплю этой смеси наносят на матовуюповерхность обработанной пленки и высушивают, На место нанесения материалакладут покровное стекло и исследуютлюминесцентном микроскопе.В работе были использованы энтеропатогенные. эшерихии типов ОВ коли 0111,055, 026 и вакцина СТИ и соответствующие им иммунные люминесцентные сыворотки,На всех исследуемых материалах наблюдалось достаточно яркое свечение бактерий (, ). Однако наилучший эффект был получен с ацетилцеллюлозой пленкой типа "Владипор", В люминесцентном микроскопе пленка имеетоднородный черный фон, на которомярко светятся желто-зеленым цветомокрашенные специфической сывороткойбактерии.Предлагаемый способ позволяет по 15лучить однородный контрастный фон дляисследования микрообъектов, окрашенных как флуорохромами, так и специфическими иммунофлуоресцентными сывороткамиСпособ прост в осуществлении, эко 26номичен, благодаря ему сокращается в3 раза процесс пробоподготовки ив 2-3 раза по сравнению с известнымьремя исследований микрообъектов подмикроскопом. Пленочный фильтроваль 25йый материал, обработанный по предлагаемому способу, приобретает дополнительную эластичность и прочность,улучшается удержание препарата на подложке.Использованиепредлагаемого способа. позволяет автоматизировать процесспробоподготовки и процесс исследования под микроскопом,Формула изобретения1. Способ обработки пленочныхФильтровальных материалов для люминесцентной микроскопии путем их окрашивания и последующего высушивания,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения контрастности фощ на материала, упрощения и сокращения времени обработки, перед окрашиванием пленочный Фильтровальныйматериал погружают в глицерин до полного просветления, после чего подсушивают, а окраску ведут при комнатной температуре путем погруженияв черную тушь на 2-3 мин.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Латинская А.С, Микрс биологияс техникой микробиологических исследований. И "Медицина", 1972,с, 35.2. Авторское свидетельство СССРУ 358362, кл, С 12 Е 1/10, 19 У 2.