Способ количественного определенияпировиноградной кислоты

а 853497 Союз СоветскихСоциалистическихРеспубпик ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. 1) Дополнительное к авт. свил-в)М. Кл. 01 М 21/7 Государстввииыи комитет СССР по делам изобретеиий и открытий(088. 8) а опублик ия Автор зобретен.А,Телегина ни А Н БахаЩ Ордена Ленина институт биохимии 1 Заявитель) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕН ПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТЫпри на- рофотометтом астидроокиси натрия последующим спек аств ва олученного п ппе 5 Е еНаиболее б изтеим к предлага нической сущност ультату является о определения ии слоты путем бра пробы раствором альдегида в этан м способу по тех стигаемому рез количественног виноградной ки анализируемой метиламинобенз способоотки-диле и пособаому разнакам получ вляю Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения иировиноградной кислоты,Известен способ количественного определения пировиноградной кислоты путем обработки анализируемой пробы трихлоруксусной кислотой и центрифугирования. Полученный супертатантобрабатывают раствором 2,4-динитрофенилгидразина в присутствии соляной кислоты и этилацетатом, отделяют этилацетатный слой, обрабатывают гидро- окисью натрия и фотометрируют 11.Недостатком способа явгяется изкая точность - ошибка определения рировак.ем и риэ р вора 123.Недостатком этого способа является невысокая избирательность, поскольку определению мешают сахара, альдегидм, аскорбиновая кислота,кетоны.Целью изобретения является повь ние избирательности определения.Поставленная цель достигается тем, что к раствору, полученному после обработки анализируемой пробы раствором п-диметиламинобензальдегида в этаноле и раствором гидроокиси натрия при нагревании, добавляют соляную кислоту до рН 5,9-6,0 и пропускают его через колонку с окисью алюминия с последующим элюированием и-диметиламинобензальпировиноградной кислоты раст" вором гидроокиси натрия и спектрофотометрированием элюата.Отличительными при и с я тся добавление к енн85349 10 ВНИИПИ Заказ 5641/18 Тираж 907 Подписное Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул,Проектная, 4 створу соляной кислоты до рН 5,9-6,0Уи пропускание его через колонку с окисью алюминия, последующее элюирование и-диметиламинобензальпировиноградной кислоты раствором гидроокиси натрия и спектроФотометрирование элюата.Предлагаемый способ дает возможность строго количественно определять содержание пирувата в биологических объектах за счет использования стадии выделения производногопирувата на колонке с окисью алюминия.П Р и м е Р К исследуемому образцу (1 мл бесцветного, безбелкового 15Фильтрата) приливают 0,3%-ный раствор п-диметиламинобензальдегидг в эуаноле (2 мл) и 25%-ный водный растворгидроокиси натрия (1 мл). Смесь выдерживают 75 мин в водяной бане при 2037 С, охлаждают ледяной водой, сразуже доводят" рН до 6 разбавленной соляной кислотой и тотчас наносят наколоуку с окисью алюминия (1 х 3) см(то же для рН 5,9). 5Колонку промывают этанолом для удаления избытка реактива и производных нейтральных карбонильных соединений (объем этанола составляет 8-10объемов сорбента), Производное пирувата элюируют с колонки 5%-нымводным раствором гидроокиси натрияи сразу же измеряют поглощение щелочного элюата при 410 нм противконтроля на реактувы. Контроль, в 35котором вместо исследуемого образцаберут 1 мл воды, обрабатывают по тойже схеме, что и опытный образец. Содержание пировиноградной кислоты рассчитывают по калибровочному граФику. 40Для построения калибровочного граФика 1 мл аликвоты водных растворовпировиноградной кислоты, приготовленных в концентрациях 25; 50;.100; 200; 400 мкм, обрабатывают, как 45описано в приведенном вьппе примере,элюируютс колонки с окисью алюминия4 мл 5%-ной гидроокиси натрия и измеряют поглощение при 410 нм против контролей, в которых вместо пировиноградной кислоты берут воду,При концентрации раствора пировиноградной кислоты 25; 50; 100; 200;400 мкм поглощение при 410 нм .соста 7 ф1 вляет 0,075; 0,15; 0,31; 0,62; 1,24 соответственно.Калибровочный граФик, полученный таким дбразом, представляет собой прямую линию, которая проходит через нуль. Поглощение для 0,1 м раствора пировиноградной кислоты равно 0,31Предлагаемый способ позволяет количественно и с достаточной избирательностью определить содержание пировиноградной кислоты в биологических объектах за счет использования стадии выделения производного пиру- вата на колонке с окисью алюминия и удаления при этом мешающих определению производных нейтральных карбонильных соединений,Такой способ прост в исполнениине требует дорогостоящих реактивови,оборудования и может быть воспроизведен в лабораторных условиях. Ошибка определения способа - 0,46%.Предлагаемый способ может найтиширокое применение для научных целейв биохимии и медицинской биохимии,Формула изобретенияСпособ количественного определения пировиноградной кислоты путем обработки анализируемой пробы раствором и-диметиламинобензальдегида в этаноле и раствором гидроокиси натрия при нагревании включающий спектроФотометрирование, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения избирательности определения, к полученномураствору добавляют соляную кислотудо рН 5,9"6,0 и пропускают его через колонку с окисью, алюминия с последующим элюированием п-диметиламинобензальпировиноградной кислоты раствором гидроокиси натрия испектроФотометрированием элюата. Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. Коренман И.Мфотометрическийанализ. М "Химия", 1970, с. 132,2. М.Капепга, Ч.ОЬКцга, Т.МовозеСЬговаодгарЬу дейегв 1 пайоп оГр 1 гочаг ас 1 д - СЬев. апд РЬагв1971, 19, р, 2241-2246 (прототип).