Способ получения колоний кроветворных клеток у птиц

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОБУСНОМУ СВИ ВТЕЛЬСТВУ Союз Соеетскик Сециапистикескик Республик(51)М. Кл,2 С 12 К 9/00 1 Государственный комнтет СССР по делам нзобретеннй и открытий(72) Авторы изобретения Н,И, Дриэе и Е,И. Дерюгина Р В.Лацис ) Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Энамени государственный университет им. М.В. Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛОНИЙ КРОВЕТВОРНЫХ КЛЕТОК У ПТИБ Изобретение относится к способам получения культур животных тканей и может быть применено в медицине, гистологии, гематологии и эмбриологииИзвестен способ получения гемопоэтических колоний у млекопитающих пу тем облучения мьааей ионизирующей ра" диацией и последующего введения клеток костного мозга интактного организма в вену хвоста облученной мыши 11.Способ имеет следующие недостатки:трудоемкость способа;необходимость сложной идентификации донорских кле" ток;,использование способа возможно только на чистых линиях животных.Известен способ получения гемопоэтических колоний у млекопитающих путем облучения ььгмей ионизирующей радиацией и последующего введения клеток костного мозга крысы в вену хвоста облученной мыши 2).Способ имеет следующие недостатки:трудоемкость способа;необходимость сложной идентификации донорских клеток, например, реакция на кислую фосфатаэу или применение люмииисцентной микроскопии; использование способа возможно толькона линейных животных.Известен способ получения кроветворных колоний у птиц путем введения клеток костного мозга цыплят в вену крыла сублетально облученных цыплят с последующей инкубацией в течение 6-12 сут, извлечением костного мозга из кости голени и проведения бензидиновой реакции 3).Прототип имеет следующие недостатки: трудоемкость способа; низкий выход колоний, вследствие низкой выживаемости цыплят; невозможность отличия экзогенных колоний, образую шихся из клеток донорского материала от эндогенных, образующихся из собственных клеток; воэможность использования способа лишь на одновидо вом материале.Белью изобретения является повышение выхода колоний и более точная идентификация колоний кроветворных клеток.Бель достигается тем, что в качестве донора используют перепела, а после проведения бенэидиновой реакциидополнительно проводят реакцию Фельгена, йо которой судят о нали734282 . Формула Изобретения Составитель Д. Данишевский Редактор Т. Девятко Техред М.Петко Корректор В. СиницкаяПодписное Заказ 2010/36 Тираж 522,БНИИПИ ГосУдарственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5,чии донорской колонии кроветворныхклеток.П р и м е р 1 Трехнедельныхцыплят облучают сублетальио дозой750 Р по 50 Р/мин, Через 1 сут послеоблучения в крыловую вену вводят4 х 10 клеток желточного мешка перевпела, например на стадии 60 ч инкубации, в 0,6 мл суспенэии. На 7 сутпосле введения клеток цыпленка декапитируют и осторожно вскрывают кости конечностей, извлекают костныймозг и просчитывают количество бензидин-положительных макроколонийпосле бенэидиновой реакции, в 8 костях каждого цыпленка (бедерных, голени, плечевых, локтевых). Для гистологической обработки костныймозг проводят. через кедровое маслои заливают в парафин, На срезахдополнительно проводят реакцию Фельгена,Образуется при эгом 123 бенэидин-положительные колонии в костном мозге цыпленка. Экэогенные колонии составляют 775 от общего числа колоний на срезах. Все это колонии кроветворных клеток,П р и м е р 2. Трехнедельныхцыплят облучают сублетально дозой800 Р по 50 Р/мин. Через 1 сут. после облучении в крыловую вену вводят1,510 клеток почки зародыша перепела, например на стадии 60 ч инкубации, в 0,6 мл суспензии, На9 сут производят дальнейшие операции, согласно примеру 1.Образуется при этом 435-бенэидин.положительных колоний. Экэогенныеколонии кроветворных клеток составляют 79 от общего числа колонийна срезах.П р и м е р 3. Трехнедельныхцыплят облучают сублетально дозой850 Р по 50 Р/мин. Через 1 сут. после облучения в крыловую вену вводят610 клеток иэ собственно эароЬдыша перепела, например на стадии48 ч инкубации. При этом образуется87 бенэидин-положительных колоний в костном мозге цыпленка, Экзогенные колонии кроветворных клеток составляют 72 от общего числа колоний на срезах.Использование предлагаемого способа имеет следующие преимущества перед известным; упрощение способа повышение выхода колоний с одновременной надежной и простой идентификацией экзогенных и зндогенных колоний кроветворных клеток; расширение круга объектов. 15 Способ получения колоний кроветворных клеток у птиц путем введенияв вену крыла сублетально облученногоцыпленка кроветворных клеток донора с последующей инкубацией в тече ние 7-9 сут, извлечением клетоккостного мозга и проведением бенэидиновой реакции, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения выхода колоний и более точной 25 идентификации колоний кроветворныхклеток, в качестве донора используют перепела, а после проведениябензидиновой реакции дополнительнопроводят реакцию Фельгена, по которой судят о наличии донорских колоний кроветворных клеток.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 35 1 . 1 .Е .,Н с .цЕСос Е,"А д .ес е эц 1 етпепс о; Юе гайабоп зепь 1 ч 1 Ь о 1 погтоас щоцзе гуопе -таггоъ сессз,Вайо.йеь.,1961, И,Ю 2 вг 4 О С2,%0 АМ.,Т 1 И 3,51 тщпочйсЬ 1 МсСойос 1 зЕ.ЪСЪоСосаР соСопогщнц сеИя апд сеИзо% Юе ВарЬо 1 д зчйеьз,Л,Ехр. Мед,19 Ь 8,М 27,455-464.3.5 сиъагц 1 3 К 1 дои ч.,"Э 1 Иет еоОаОоп о 145Ъзеторо 1 еОс МзьцЕэ 1 ото етЬтзо апдадцИ Ь)есЪед 111 о 1.гад 1 Ыед сЪ 1 сЛеоэ",Ъ ЬъЬзоС Ехр МогрЬоВ;1975,ъ 5,259-278.