Способ получения эндогенных резерпиноподобных веществ

("3) УД 615 45 ;591.8 (088. 8) до делам изобретен и открытий.80. 6 летеиьата опубликования описания 12,2) Авторы изобретения Петренк в, А. М. Вихерт П. Г МН СС есоюзный кардиологический научный ц 71) Заявите ОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЕННЫХ ЗЕРПИНОПОДОБНЫХ ВЕШЕСТВ 4) СПОС нок отбирают зоны, флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете с длиной волны 270-300 нм, которые экстрагируют хлс- рофармом или апетоном, полученный экстракт профильтровывают через бактериальный фильтр, хроматографируют в системе изобутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4:1;1 с последующим отбором фракций с Й 0,75; 0,61; 0,45, соответствующие резерпинопоаобным (РП) фракциям 1, 2, 3, каждую из которых экстрагируют и рехроматографируют.Способ поясняется следующим примее 0-70 линии Фчают ножн15 г песнезаций прпячениемотмывкой5,0-6, 0. генат до Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, и касаетсявыделения алкалоидоподобных веществ.Способ получения эндогенных резерпиноподобйых веществ из тканей животныхи человека в патентной и научно-технической литературе не описан.Целью изобретения является получениэндогенных резерпиноподобных веществ изтканей животных и человека,юЭта пель достигается тем, что тканьживотных и человека измельчают, экстрат ируют хлорной кислотой, термостатируютв течение 2-18 ч, фильтруют, подшелачивают раствор, экстрагируют смт 1 сью хлороформ: н-пропанол: изобутанол в соотношении 13:1:1, отделяют органическую фазу,упаривают и хроматографируют с использованием системы растворителей хлороформ: метанол в соотношении 95:5 в тонОком слое на пластинке "Силуфол", пластинку после высушивания развивают в системе изобутанол; уксусная кислота: водав соотношении 4;1:1, с высушенных пласти-. кани сердца из самцов крыссразу после забоя измельи, затем растирают с 10- ка 5-6 мин, Песок для гомогеедварительно обрабатывают кис 6 г 1 НС 1 в течение 24 ч и дистилированной водой до рН Сразу после растирадия в гомоавляют 50 мл 0,4 МНС.РО и рас продолжают еще -6 мин. Затем7319 доводит общий объем 0,4 Й НС 1 0, до 200 мл и термостатируют при 37 оС в течение 18 ч в темноте, Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр, фидьтрат подщелачивают водным аммиаком до рН 10-11. Экстрагируют встряхиванием в делительной воронке трижды по 3 мин порциями по 60 мл смесью хлороформ: иэобутанол; н-пропанол в соотношении 13;1;1. Степень полноты экстракции контролируют по интенсивности пика флуоресценции изолированных РП-фракций при 515 нм в хлороформе (длина волны возбуждения 270 нм), После экстракции указанной смесью органическую фазу отделяют от водной центрифугированием в течение 8 мин при 10000 д Органическую фазу концентрируют в вакууме на роторномоиспарителе при 40 С и наносят на плаьтинки "Силуфол". Хроматографируют в сис теме хлороформ: метанол (95:5 по объему). Затем эту же пластинку после высущивания при комнатной температуре развивают в системе иэобутанол: уксусная кислота; вода (4:1:1), После высушим ния при комнатной температуре пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете 1270-300 нм). Все флуоресцирующие зоны соскребают, объединяют и экстрагируют хлороформом или ацетоном термоста- ЗО тированием при 37 ОС в течение 3 ч.Экстракт фильтруют через бактериальный фильтр, фильтрат концентрируют на роторном испаритеде при 40 С и снова хроОматографируют в тех же системах, как 35 описано, Вновь экстрагируют флоуресцирующие эоны, концентрируют и упариваютих, как, описано. Затем сроматогрвфируютв системе изобутвнол: уксусная кислота: вода (4:1:1) и соскребают флуоресцнрующие в Уф-свете эоны с й 0,75; 0,61;0,45, соответствующие РП фракциям 1,2, 3. (РП 1, РП 2, РП 3), каждую иээтих фракций экстрагируют и рехроматографируют по отдельности для полной 45очистки еще 2-3 раза.После описанной очистки РП 1, РП 2,РП 3 гомогенны, раствстримы в виде свободных оснований в хлороформе; этилацетате, этаноле и других органических раство- Ярителях, В виде хлоридов и перхдоратоврютворимы в воде. На хроматографической пластинке в Уф свете РП фракции обладают характерной флуоресценцией РП 1 голубой, а РП 2 и РП 3 желтой.55 б 8Предложенный способ был испытан длявыделения и очистки РП фракций иэ тканей крыс (печень, почки, мозг) и быка(печень, сердце, пинеальная железа), человека 1 сердце, почки, надпочечники, гипотеламус, аорта). Во всех случаях с разными выходами выделяли гомогенные РПфракции. Резерпиноподобные вещества действуют на животный организм подобно экзогенному резерпину. Это выражается всущественных физиологических сдвигах, об условленных изменением уровня свободных и связанных катехоламинов в животных тканях,Проведенное физиолого-гистохимическоеисследование обнаружило направленное накатехоламиновый обмен и сосудо-двигательный тонус действие эндерпинов, что свойственно и экзогенному резерпину,Выделение эндогенных резерпиноподобных веществ из тканей животных можетнайти в дальнейшем широкое применениепри получении лекарственных форм новьго типа с направленность на регуляциюобмена таких важных метаболитов, какадреналин, норадреналин, допамин, серотинин, мелатонин.Формула изобретенияСпособ получения эндогенных резерпиноподобных веществ, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, ткани животных ичеловека измельчают, экстрагируют хлорной кислотой, термостатируют в течение2-18 ч, фильтруют, подщелачивают раствор, экстрагируют смесью хлороформ; нпропанод: изобутанол в соотношении1 3:1:1, отделяют органическую фазу,упаривают и хроматографируют с использованием системы растворителей хлороформ:метанол в соотношении 95:5 в тонкомслое на пластинке фСилуфол, пластинкупосле высушивания развивают в сисуеме изобутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4;1;1, с высушенных пластинок отбирают зоны, флуоресцирующие вультрафиолетовом свете с длиной волны270-300 нм, которые экстрагируют хлороформом или ацетоном, полученный эксэ.ракт профильтровывают через бактериальный фильтр, хроматографируют в системе изобутанод: уксусная .кислота: водав соотношении 4:1:1 с последующим оъбором фракций с й0,75; 0,61; 0,45,соответствующие резерпиноподобным фракциям 1, 2, 3, каждую из которых экстраг ируют и рехроматографируют.