Способ получения гемоглобина

-и"-И-"-Е ОПИСХИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 090878 (21) 2652827/28-13с присоединением заявки Й 9(23) Приоритет(51) М. Кл. Ь 61 К 35/18 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Л.Г. Богомолова, М.М, Великина, И.М. Быстрова и Г.Я. Гдалевский Ленинградский ордена Трудового Красного Знаменинаучно-исследовательский институт гематологиии переливания крови, Изобретение относится к гематологии, а именно к способу получениянативного гемоглобина.Известен способ получения гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки и гемолиза с последующей очисткой гемолизата от балластных .веществ, отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина (1 .Однако известный способ не обеспечивает дастаточной чистоты конечногопродукта вследствие образования метгемоглобина и попадания в раствор фосфолипидов, повышающих прокоагулянтную активность. Кроме того, по этому способу невозможно получить концентрированный раствор гемоглобина, так как происходит заметное нарастание прокоагулянтной активности пРепарата.Цель изобретения - повышение концентрации и чистоты целевого продукта.Цель достигается тем, что очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бенто-. нита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина 2через колонку с катионитом в натриевой форме.4Способ осуществляют следующим образом. К эритроЦитарной массе, отмытой раствором хлористого натрия, добавляют охлажденную (О + 2 С) дистиллированную воду, гемолиз ведут в течение 30- 4 мин. Полученный гемолизат обрабатывают смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1, и центрифугируют. Образовавшийсяраствтзр гемоглобина пропускают через колонку с катионитом в натриевой форме.П р и м е р. 2 л эритроцитарной массы, оставшихся после отделения стромы, смешивают с 8 л 1,6 хлорида натрия. Смесь перемешивают и содержимое вносят в сепаратор Сатурн, где происходит отделение эритроцитов от более легкой части (воды). Полученный 1-1,2 л отмытых эритроцитов вливают в бутыль, содержащую 4 л охлажденной до 2 оС дистиллированной воды, Гемолиэ происходит в течение 40 мин при перемешивании. В ту бутыль к 5 л гемолизата добавляют 400 г смеси бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятых в соотношении 7:1. Содержимое размешивают721100 Формула изобретения Составитель Л. МорозоваРедактор В, Трубченко Техред Э,Чужик Корректбр Л. Гриценко аказ 26/5 . Тираж 673 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5МФилиал ППППатент , г, Ужгород, ул. Проектная, 4 3прй плавном вращении ее в горизон" "тальноййаПравлейии в течение 1 ч.После чего смесь гемолизата с сорбентом центрифугируют в центрифуГе ЦЛР в течение 30 мин при 3000 об/мини температуре +2 фС, 3 л полученногосупернатанта (раствор гемоглобина)ропускают под давлением 0,6-0,8 атмчерез асбестовые пластины (типа СФ)фильтра Сальникова затем - через колонку с катионитом Кув натриевойформе, содержащую 100 г катионита.10К фильтрату (около 3 л) добавляют90 г порошкообразной глюкозы, рН раствора доводят до 7,2-7,4, 45 мл 10-його гидрокарбойата натрйя (ВайСО ) .Стерилиэуют раствор посредствомфильтрации через фильтры фМиллипорфс диаметром пор 0,22 ммк. Фильтратразливают во флаконы емкостью 250или 500 мл, замораживают при теМпературе не выше -35 фС и затем подвергают 20лиофиЛиэации. Хранится препарат всухом состоянии при 0-бфС в темном.Препарат гемоглобина, полученныйпредложейным способом, содержит в среднем в 2 раза меньше метгемоглобина 25и обладает меньшей проиоагулянтйойактивностью при большей (в 2 раза)концентрации гемоглобина в растворе,Способ позволяет повысить выход гемоглобина, а также получить препарат его, свободный от стромы и растворимых фосфолипидов, повышающих прокоагулянтнуюактивность,Способ получения гемоглобина изэритроцитарной массы путем ее отмывки и гемолиэ,а с последующей очист-.кой гемолиэата от балластных веществ,отделения осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина,отличающийся тем, что,с целью повышения выхода и чистотыцелевого продукта, очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, взятыхв соотношении 7:1, и затем пропускаютраствор гемоглобина через колонкус катионитом в натриевой форме,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Великина М.М, Получение и экспериментальное изучение гемоглобинсодержащего продукта (эригем), автореферат диссертации кандидатской.Л., 1967, с. 18.