Способ количественного определения оксикобаламина в ферментационной среде

: "4-:. -, ОБРЕТ МУ СВИДЕТЕЛЬСТ К АВТО(61 Дополнительное к авт и 51) М Кл6 01 Х 21/2 88/2306,10.77 (21) 2 иненисм ,аявк 2) Заявле с прис Государственный комите 23) Пр тст 53 543,24 (088,8 43) Опубликовано 30.11,7 ллетен по делам изабретени бтир ть) Заявитель Курганский комбинат медицинских препаратов лий Син КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНА В фЕРМЕНТАЦИОННОЙ СРЕДЕ 54) СПОСО КСИКОБАЛ Изобретение относится к области контроля производства витамина В 2 и может быть использовано при определении содержания кобаламинов в ферментационной среде.Известен способ количественного опреде ления оксикобаламина в ферментационной среде, заключающийся в том, что пробу анализируемого вещества подвергают нитритной обработке, гидролизу в кислой среде, полученный гидролизат обрабатывают 10 цианистым натрием при рН 7,0 - 7,5, выдерживают раствор в темноте, очищают фенол четыреххлористой смесью, проводят экстракцию водой с добавлением ацетона, промывают эфиром полученный водный ра створ витамина В 1 е с последующим спектрофотометрированием полученного водного раствора при длине волны 548 нм 1.Недостатком способа является его сложность. 2 ОЦель изобретения - упрощение способа.Это достигается описываемым способом, который заключается в том, что пробу фсрментационной среды промывают водой, выделенную биомассу подвергают кислотному 25 гидролизу при рН 4 - 4,5 при нагревании, гидролизат подвергают фотолизу на свету, очищают гидролизат активированным углем с последующим вымыванием с угля образовавшегося оксикобаламина этиловым спир том и повторным фотолизом элюата с пследующим спектрофотометрированием плученного р а створ а.П р и м е р. Проводят количественное определение содержания оксикобаламина в анализируемой пробе. Определенное количество пробы (40 мл) фугуют на лабораторной центрифуге при 5 - 6 тыс. оборотов в 1 мин в течение 25 мин.Полученную после фуговки биомассу промывают дистиллированной водой (1 объем пробы: 1 объем дистиллированной воды). Далее проводят кислый гидролиз биомассы при рН 4 - 4,5 на водяной бане в течение 40 мин. Гидролизат отделяют на центрифуге и выдерживают на свету в течение 25 - 30 мин, Затем гидролизат очищают активированным углем марки Б (на 60 мл гидролизата - 2 г угля). Далее проводят элюирование оксикобаламина с угля 65 е/о -ным этиловым спиртом. Элюат выдерживают на свету 30 мин. Определяют содержание оксикобаламинов спектрофотометрически при 1=362 нм (максимум поглощения) окспкобаламинов. Расчет содержания оксикооаламинов в производственной пробе проводят по следующей формуле1 О КЕтсм 1.4РЕ - удельныи показатель поглощенияоксикобаламина при 1=352 нм; 17 - объем производственной пробы, мл (г). 5Для получения сравнительных данныхпараллельно проводят определение содержания оксикобаламина в производственной пробе известным способом.Сравнительные данные представлены втаблице (С,=23,1; С,=23,5) Продолжение Содержание оксикобаламинов,определенное существующим методом, мкг/млСодержание окси коба ламинов,определенное существующим методом, мкг/млПроба Проба Формула изобретения10 щают гидролизат активированным углем с последующим вымыванием с угля оксикобаламина этиловым спиртом, повторным фотолизом элюата и спектрофотометрированием полученного раствора.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Раковский Ю. С. и Малярова 3. А. О включении предшественника 5,6-диметилбензимидазола в молекулу витамина Вд, - Химфармжурнал, 7.50,63 (прототип). Способ количественного определения оксикобаламина в ферментационной среде, включающий спектрофотометрирование раствора, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, пробу анализируемой среды промывают водой, выделенную биомассу подвергают кислотному гидролизу при рН 4 - 4,5 при нагревании, гидролизат подвергают фотолизу на свету, очи Изд. Ме 626 Тираж 1090 Заказ 2519/15 Подписное Типография, пр. Сапунова, 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 25,6 24,6 25,3 25,2 18,6 17,2 18,5 13,6 13,1 5,214,66,9 0,0 24,4 24,6 26,2 28,8 28,6 28,1 27,5 26,3 27,7 28,2 27,6 27,1 25,6 25,6 26,2 25,6 18,0 16,0 17,6 13,5 13,5 14,7 15,2 16,3 0,3 25,1 26,0 26,4 29,0 27,9 28,8 25,4 28,2 29,0 30,0 29,2 26,9 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 28,2 25,4 26,2 28,3 25,8 25,0 32,3 25,0 24,2 25,6 21,8 22,2 25,6 18,2 24,3 10,5 27,9 28,1 25,8 25,17,4 13,5 27,6 23,4 25,6 27,8 25,4 26,4 29,4 27,7 26,6 32,8 24,3 27,3 26,221,2 21,0 26,9 21,3 27,0 13,0 28,4 29,3 25,7 21,3 6,9 15,8 29,2 22,3 24,6