Способ получения ферментного препарата гигролитина

(7 в торыретения А,.С.Стшкин и оюзный научно-иссл антибиотиков и фе довательский технологический институментов медицинского назначения яяител ОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРА ГИГРОЛИТИНА ПО обретение относится к медицинской одия. оликошо ности к произв ского назначен лучения проте олитина, одна получать хоро остаточно выс Известен способ получения гигролитина из фильтрата культуральной жидкости Лс 10 Опогпусеь ИуфобсорсоЬ предусматривающий обработку фильтрата сульфатом аммония, после чего полученный осадок растворяют в воде и осаждают охлажден.ным ацетоном, осадок отделяю и растворяют в 30%-ном водном растворе охлажденного, ацетона, осаждают целевойпродукт 10 обьемами ацетона и последовательно оппцают хроматографией на сефадексе типа Г 75, ДЕАЕ Аи Г,30 при этом очистку фермента проводят в присутствии 0,001 моль раствора хлористого. кальция 11,. промышленности, в част ству ферментов медицинИзвестны способы по тического фермента гигр этими способами нельзя очищенный препарат с д ким выходом. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения антнгельминтного антибиотика гигромипина, предусматривающий культивирование продуцнруюшего его фермента нв питательной среде, согласно которому от кулътуральной жидкости последователь но отделяют мицелий, ионы кальция в виде фосфатов, гигромицин В сорбцией на .катионите,.гигролитин высалива 1 от сульфа том аммония, переосаждают низшими спиртами, обрабатывают активированным углем и лнофильно высушива 1 от. Обший выход гигролитина 5-6%, активность2 ПЕ/мг препарата 2.11 ель изобретения - разработка направленного биосинтеэа гигролитина, сокращение длительноСти технологического процесса, повышение выхода и улучшение качества целевого продукта,Для достижения поставленной цели культивирование проводят при 31-33 Со в течение 72-108 ч, высаливанне фермен та ведут после отделения мнцелия допол663715 3 Составитель И. ПриваловаРедактор О, Кузнецова ТехредС. Мигай Корректор Е, Пуквч Заказ 2922/21 Тирвж 525 Подписное ЦНИИПЙ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рвушская наб. д, 4/5Филивл ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 иительным введением хлористого кальцияв количестве 0;5-1% от его объема, после чего осуществляют удаление примесейэквимлентным количеством целдюлозы иалюмовммонийных квасцов при рН 4,85,0, при атом гигромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата,Способ осуществляют следующим образом, 1 ОПроцесс ферментвции Лс 0 пощусей ИуР 6 сорсм проводят в аппврвтах емкостью 2000 л нв среде известного составапри температуре 31-33 С, аэрации0,4 об/об среды в 1 мин в течение 96 ч, 5Протеолитическвч вктивнооть культурвльной жидкости достигает 35 ПЕ/мл, содержание гигромицина Б 70 ЕД/мл,Полученную культурвльную жидкостьфильтруют, затем к 100 л фильтрвта добавляют 60 о сульфата аммония и 51 охлористого кальция в виде 30 о-ного раствора, при температуре 5 С, Выход фермента нв стадии высаливания 90%. Осадок5рвстворяют в воде, активность раствора300 ПЕ/мл. К раствору гигролитинв добавляют целлюлозу в виде 2 о-ного раствора в количестве 0,3%), с эквивалентным количеством алюмовммонийных квасзоцов, при значениях рН реакционной смеси/4;8, После отделения целлюлозы растворфермента разбавляют дистиллированнойводой до 100 ПЕ/мл, добавляют активироввнный уголь марки ОУ в количестве3%, рН раствора устанавливают 7,0. Пос-З 5ле отделения угля экстракты пропускаютчерез кврбоксильный квтионит КБилиКБП 2 для удаления возможных следовгигромицинв Б и лиофильно сушат,Общий выход фермента с активностью3-5 ПЕ/мл составляет 30%, считая нанативный раствор. формула изобретения 1, Способ получения ферментного препарата гигролитина, предусматривающийкультивирование продуцирующего его фермента на питательной среде, отделениемицелия и ионов кальция, сорбцию сопутствуюшего фермента гигромицина на карбоксильных кагионитах, высвливвние фермента сульфатом аммония, переосвждениеего, обработку активироввнным углем исушку препарата, о т л и ч в ю щ и йс я тем, что, с целью обеспечения нвпрввленного бносинтеэв гигролитинв, сокрашения процесса его получения и повышения качества целевого продукта, культивиромние проводят при температуре 31 фЗЗ С в течение 72-108 ч; высаливаниефермента ведут после отделения мицелияи осуществляют удаление примесей эквивалентным количеством целлюлозы и алюмовммонийных квасцов при рН 4,8-5,0,при этом гигромицин удаляют непосредственно перед сушкой препарата.2. Способ по и. 1, о т л и ч в юш и й с я тем, что при высвлимнии фермента в нативный раствор вводят хлористый квльций в количестве 0,5-1 о ог егообъема,Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССРЖ 507058, кл. С 12 Д 9/14, 1972.2, Авторское свидетельство СССР .