Способ определения количества ионов аммония в растворе

(5) ВЕННЫЙ КОМИТЕТТЕНИЯМ И ОТКРЫТССР ГОСУДАР ПО ИЗОБ ПРИ ГКН БРЕТЕ ИЗ ИС тгу,ИЧЕСТРЕ ство, фиущн ость ичества ят путем 4 СЧ ЬЭ 4 0Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Йстоаз, Сагре, Апа 1. Восл1971, ч,42, М 2, р. 560-568. 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛ ВА ИОНОВ АММОНИЯ В РАСТВО 57) Использование: сельское хозяй зиология растений, медицина. С изобретения: определение кол ионов аммония в растворе провод Изобретение относится к способам определения количества аммиака и солей аммония в растворе и может быть примененов сельском хозяйстве, аналитической химии, биохимии и медицине,Известен способ определения количества аммиака и солей аммония в растворепосредством смешения их с фенолгипохлоритным реагентом и колориметрическогоопределения продукта реакции.Способ имеет следующие недостатки:невысокая чувствительность, длительностьи неспецифичность.Известен способ определения аммиакаи количества ионов аммония в растворе посредством их смешения с ферментом глутаматдегидрогеназой, ее субстратами -й-кетоглуторатом и НАДН, и последующегоспектрофотометрического измеренияуменьшения концентрации НАДН,Способ характеризуется недостаточнойчувствительностью, длительностью и узкимдиапазоном измерений. смешения анализируемой пробы с растворами. содержащими.глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией биолюминесценции реакционной смеси, причем в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток РЬотоЬастегШп) йзпег 1, в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентрации (2,9 - 3,9)10 мас. , регистрируют на люминометре биолюминесценцию смеси, а о количестве ионов аммония-судят по скорости падения уровня биолюминесценции смеси, 1 табл. Известен способ определения аммиака и количества ионов аммония в растворе посредством смешения их с растворами высокоочищен ной люциферазы из РЬотоЬастегиа 11 зсЬег 1, глутаматдегидрогеназы, ее субстратов - НАДН и а -кетоглутората и субстратов люциферазы - ФМН и тетрадеканаля в калий-фосфатном буфере со стабилизатором ферментов - Р -меркаптоэтанолом и последующего измерения на жидкостном сцинтилляционном спектрофотометре интегрального свечения смеси, который целесообразно взять эа прототип.Недостатками известного способа являются длительность, недостаточная чувствительность, узкий диапазон измерений и неэкономичность.Целью изобретения является ускорение, повышение чувствительности, расширение границ измерений и достижение экономичности способа.Способ заключается в том, что готовят смесь следующего состава (мас.7 ь): ФМ1752766 Время анализа Способ Пороговая чувствительность к аммиаку, пределы измерения, мас. Известный П е ложенный5 мин30 с 8,5 10 -32,0 103,410-1,010Составитель И,Бокша Техред М.Моргентал Корректор О.Юрковецкая Редактор В,Петраш Заказ 2734 . Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4(5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина 101,(4,1-5,1) 10 ; тетрадеканаль (1,15-1,25) 10 ; а-кетоглуторат 0,11-0,50; активатор гл- тамЪтдегидрогеназы АДФ (2,91 - 3,91): 10 глутаматдегидрогеназа (1,5-4,0) 10 ; источник бактериальной люциферазы - белковый экстракт из клеток люминесцентных бактерий РЬо 1 оЬастегШе Йзсйег 1(4 - 8) 10стабдилизатор ферментов - ф -меркаптоэтанол (5,36-6,36)10; исследуемый образец, содержащий ионы аммония 1 - 10 об.%: до конечного объема (1-1,1 мл) доводят калий-фосфатным буфером 0,9-2,0 мас,%, рН 7,55 - 7,65. Затем впрыскивают в смесь раствор НАДН с одновременным перемешиванием до содержания (1,96-2,00) 10мас. причем объем добавки составляет 4-5% от объема реакционной смеси, Концентрации подобраны путем постановки серийного эксперимента, исходя из максимально достигаемого положительного эффекта, Затем измеряют на люминометре скорость спада биолюминесценции смеси, по которой судят о количестве ионов аммония в растворе,В таблице показано, что способ ускорен по сравнению с известным в 10 раз и чувст. вительнее его в 25 раз, причем диапазон измерений шире на 4 порядка, т.е, границы измерений расширены в 10 раз.Экономичность способа достигается 5 примененйем белкового экстрактаРЬотоЬастегов Яэсйег вместо высокоочищенной люциферазы.Формула изобретения. Способ определения количества ионов 10 аммония в растворе, предусматривающийсмешение анализируемой пробы с растворами, содержащими глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией био люминесценции реакционной смеси, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток 20 РпотоЬастегопт ЛзЬег 1, при этом в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентра.,ии (2,9-3,9)10мас,%, биолюминесценцию смеси регистрируют на люминометре, а о количестве ионов аммо ния судят по скорости падения уровня биолюминесценции смеси.