Способ количественного определения л-аминокислот

11 11 640181 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических .,77 (21) 2506527/23-0 Заявлен с присоединением заявк Государственный комитет(54) Дата опубликования описания 30.12,78(53 по делам изобретении н открытий(088.8) Авторынзобретси В.-Ю, К, Шведас, И. Ю. Галаев и И. В. Бе осковский ордена Ленина и ордена Трудового Знамени государственный университет имени М. В. Ломоносова1) Заявител ног 54) СПОСОБ ЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕН-АМИНОКИСЛОТ 1:1 при ектрофоэтом расИзобретение относигся к области аналитической химии, а именно к способам количественного определения а-аминокислот.Известен способ количественного определения аминокислот путем обработки анали зируемой пробы 2,4-динитрофторбензолом при нагревании до 60 С с последующим спектрофотометрированием полученного окрашенного раствора 1.Недостатком способа являются трудоем кость и длительность проведения анализа.Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения а-аминокислот, заключающийся в 15 обработке анализируемой пробы нингидрином с последующим разбавлением пропанолом и спектрофотометрированием полученного раствора 2.Недостатками способа являются: низкая 20 чувствительность (0,02 мг/мл) и длительность определения (40 - 50 мин).Цель изобретения - повышение чувствительности и сокращение времени определения. 25Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения а-аминокислот, заключающимся в обработке анализируемой пробы смесью о-фталевого альдегида и меркаптоэтанола, 30 взятых в объемном соотношении 4 - рН среды 8 - 11 с последующим сптомерированием полученного прптвора.Отличительным признаком способа является использование в качестве химического реагента смеси о-фталевого альдегида и меркаптоэтанола, взятых в объемном соотношении 4 - 1:1 и проведение обработки при рН среды 8 - 11.Определение валина прп соотношении о-фталевого альдсгпда и меркаптоэтанола 2: 1 и при рН среды - 9,7,П р и м е р 1. 0,25 мл раствора валина концентрацией 2(10 -М и 0,25 мл реагента, который готовят смешением 0,5 мл раствора о-фталевого альдегида концентрацией 10 мг/мл в этиловом сппртс.0,5 мл этанольного раствора меркаптоэтанола концентрацией 0,005 мл/мл и 30 мл 0,4 М боратного буфера с рН 9,7 (этанольные растворы стабильны неограниченно долго, реагент стабилен в течение дня), помещают в автоматический спектрофотометр и определяют оптическую плотность через 3 мин при 340 нм относительно разбавленного в два раза реагента. Оптическая плотность составляет 0,056, соответствует концентрации аминокислоты в пробе (2600+.Аминокислота известным 20 - 400 15 - 300 30 - 600 20 - 400 20 - 400 20 - 400 200 в 40 300 в 60 300 в 60 200 в 40 150 в 30 300 в 60 Аланин АргининАспарагинВалин ГлицинИзолейцин 25 - 500 10 - 200 300 в 60 300 в 60 300 в 60 200 в 40 200 в 40 400 в 80 300 в 60 ЛейцинЛизинМетионин 20 - 400 20 - 400 20 - 400 15 - 300 20 - 400 НорвалпнТреонинТриптофанфенилаланин Формула изобретения Составитель 11. СоломенцеваТсхред С. Антипенко Корректор 1. Добровольская Редактор А. Соловьева Заказ 2474/11 Изд.780 Тираж 1080 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж.З 5, Раушская набд, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 3Пример, 2. Определение аланина при рН 8 и соотношении реагентов 1: 4.Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешением 0,5 мл раствора о-фталевого альдегида в 5 этаноле и 0,25 мл раствора меркаптоэтанола в этаноле (концентрации по примеру 1) с 30 мл боратного буфера рН 8. Концентрация аланина 4 10 в М. Оптимальная плотность, измеренная через 10 мин, 0,072, что при коэффициенте экстинкции 1800-1: +.100 М- см -отвечает концентрации аланина (4,0.+0,2) 10 - зМ.П р и м е р 3. Определение триптофана при рН 11 и соотношении реагентов 1: 4.Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешением 0,5 мл раствора о-фталевого альдегида в этаноле и 0,25 мл раствора меркаптоэтанола в этаноле (концентрации по примеру 1) с 30 мл боратного буфера рН 11. Концентрация триптофана 5 10 - М, Оптическая плотность, измеренная через 10 мин, 0,116, что при коэффициенте экстинкции 2300+. +.100 М -см -отвечает концентрации трип тофана (5,0+0,2) 10 - М.Пример 4, Определение фенилаланина при рН 8 и соотношении реагентов 1:1.Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешением ЗО 0,5 мл раствора о-фталевого альдегида в этаноле и 1 мл раствора меркаптоэтанола в этаноле (концентрации по примеру 1) с 30 мл боратного буфера рН 8, Концентрация фенилаланина 3 10 в М, Оптическая плот ность, измеренная через 10 мин, 0,128, что при коэффициенте экстинкции 4200- +-100 М -см -отвечает концентрации фенилаланипа (3,00-+-0,07) 10 - М.П р и м е р 5. Определение аргинина при 40 рН 11 и соотношении реагентов 1: 1.Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешением 0,5 мл раствора о-фталевого альдегида в этаноле и 1 мл раствора меркаптоэтанола в 45 этаполе (концентрации по примеру 1), с 30 мл боратного буфера рН 11. Концентрация аргинина 3 10-М. Оптическая плотность, измеренная через 10 мин, составляет 0,232, что при коэффициенте экстинкции 50 7700+-200 М -см -отвечает концентрации аргинина (З,ОО-Ф,08) 10 - " М.Чувствительность определения а-аминокислот известным и предлагаемым способом приведены в таблице. 55 Предлагаемый способ позволяет определять а-аминокислоты в концентрациях, превышающих 0,002 мг/мл, т. е. в 10 раз более чувствителен. Кроме того, меньшая трудоемкость предлагаемого способа позволяет проводить анализ за 4 - 5 мин в отличие от 40 - 50 мин, требуемых при применении способа с использованием нингидрина. Способ количественного определенияа-аминокислот путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием полученного при этом раствора, отличающ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, в качестве химического реагентаиспользуют смесь о-фталевого альдегида имеркаптоэтанола, взятых в объемном соотношении 4 - 1: 1, и обработку ведут при рНсреды 8 - 11.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Р. Г. РцЫп Тйе аззау апс 1 сЬагас 1 ег 1 гаг 1 оп о 1 Агп 1 пез цу гпеацз 2,4-Р 1 п 11 го 1 цогоЬецгеп 1, В 1 о 1. Сйев. 1960, с. 235.2. Коренман И. М. Фотометрический анализ Методы определения органически.; соединений, М., Химия, 1960, с. 166 в 1,