Способ количественного определения -аминокислот

) 01 147 78 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЛЬСТ К АВТОРСКОМУ С 8(54)ЛЕНИЯ Фифе Гг 1) (22) (46) (71) (72) Е,В, (53) 4100936/31-042605.8623.12.87. Бюл. У 47МГУ им, М.В.ЛомоносоваА.А.Пятраускас, В,К,Швозлова и И.Л.Борисов543,42.062(088.8) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕ 01 -АМИНОКИСЛОТИзобретение касается аналитичеимии, в частности количественного определения М -аминокислоДля повышения точности и чувстельности определения АК прике пробы о-Аталевым ангидридасоединением в качестве последиспользуют дитиотреитол или мянтарную кислоту при их моляротношении, равном 1:11:10.ведут при рН 8-11 и полученныивор подвергают Аотометрированусловия позволяют определятьАК с точностью до 0,001 мг/мл50 55 Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамколичественного определения Ы -аминокислот,Цель изобретения - повышение точности и чувствительности определения.П р и м е р 1, Определение валинапри соотношении о-йталевого альдегидаи дитиотреитола 1:2 при рН 9,.,0,25 мл раствора валина концентрацией 2 10 М и 0,25 мл реагента,который готовят смешиванием 0,1 млраствора о-Фталевого альдегида концентрацией 14,4 мг/мл в этиловомспирте, 0,1 мл этанольного растворадитиотреитола концентрацией 30, 8 мг/мли 5 мл 0,1 М боратного буфера рН 9,7(этанольные растворы о-Фталевого альдегида и дитиотреитола стабильны неограниченно долго, реагент стабиленв течение дня),помещают " в ячейкуспектрофотометра и опрсделяют оптическую плотность при 340 нм стносительно разбавленного в два раза реагента, Оптическая плотность составляет 0,059, что при коэййициенте экстинкции 5700+200 М см отвечаетконцентрации валина (2,00+.0,07)х1 О М.П р и м е р 2. Определение валинапри соотношении о-йталевого альдегидаи меркаптоянтарной кислоты 1:2 и прирН среды 9,7,0,25 мл раствора валина концентраоцией 2 10 " и и 0,25 мл реагентакоторый готовят смешиванием 0,1 мг/млраствора о-фталевого альдегида концентрацией 14,4 мг/мл в этиловом спир.те, 0,1 мл раствора меркаптоянтарнойкислоты в 0,05 М боратном буфереконцентрацией 30.0 мг/мл и 5 мл 0,1 Мборатного буфера рН 9,7, помещают вячейку спектройотометра и измеряютоптическую плотность по примеру 1.Оптическая плотность составляет 0,079,что при коэфйициенте экстинкции 7700+100 М см отвечает концентрации1валина (2,00"0,03)10 М.П р и м е р 3. Определение лизинапри рН 9,7 и соотношении реагентов1: 1 (о-. Фталевый альдегид и дитиотреитол).Оптическую плотность определяютпо примеру 1. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-йталевогоальдегида в этиловом спирте, 0,05 дитиотреитола в этаноле (концентрациипо примеру 1) и 5,5 мл 01 М боратно" 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 го буфера рН 9,7. Концентрация лиэина 1 10 и. Оптическая плотность составляет 0,054 что при коэййициентеэкстинкции 10400+100 М см соответствует концентрации лизина (1,00++0,07) Ои.П р и м е р 4. Определение лизинапри рН 9,7 и соотношение реагентов1:1 (о-Фталевый альдегид и меркаптоянтарная кислота),Оптическую плотность определяют попримеру 1. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл оаствора о-фталевого альдегида в этиловом спирте, 0,05 млраствора меркаптоянтарной кислоты в0,05 М боратном буфере (концентрациипо примеру 2) и 5,5 мл 0,1 М боратного буйера при рН 9,7. Концентрациялизина 1 10 М. Оптическая плотностьсоставляет 0,057, что при коэффициенте экстинкции 11100" 300 М см отвечает концентрации лизина (1,00+ 0,03)"х 10М.П р и м е р 5. Определение глицина при рН 9,7 и соотношении реаген(о-Фталевый альдегид и дитиотреитол).Готовят реагент и определяют оптическую плотность по примеру 1. Концентрация глицина 2 10 М. Оптическаяплотность составляет 0,054, что прикоэфйициенте экстинкции 5200+100 М- 1см соответствует концентрации глицина (2,00+0,04) 10 М.П р и м е р 6. Определение глицинапри рН 9,7 и соотношении реагентов1:2 (о-фталевый альдегид и меркаптоянтарная кислота),Реагент готовят по примеру 2Оптическую плотность определяют по примеру 1. Концентрация глицина 2 10 и.Оптическая плотность 0,071 при козффициенте экстинкции 6900+100 М смотвечает концентрации (2,00 ф 0,03)х 1 о-и.П р и м е р 7. Определение гистидина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1;2 (о-фталевый альдегид и дитиотреитол),Реагент готовят и оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация гистидина 2 10М, Оптическая плотность 0,052 при коэфйициенте экстинкции 5000+100 Мсм соответствует конпентрации гистидина (2,00+ + 0,04)х 10 И.П р и м е р 8. Определение гистидина при рН 9,7 и соотношении реа 1361477гентов 1:2 (о-Фталевый альдегид и мер- буфере (концентрации по примеру 2)каптоянтарная кислота), Реагент гото- и 3,5 мл 0,1 М боратного буфера прцвят по примеру 2, рГ 9,7. Концентрация лизина 2 10 И.Оптическую плотность определяют по 5 Оптическая ппотность составляетпримеру 1, Концентрация гистидина0,057, что прц коэффцццечтг"кстцпк"2 10 М. Оптическая плотность 0 Обб ццц 11100+300 Мсм , тзечает конг;при коэффициенте экстицкции 6500 + центрации лизина (1,00 0.0,) 10 .м.100 М см соответствует концентра- П р и м е р 13. Определен; алввцции (2,00+0,03) 10 М.У10 на прц рН 11 и соотношении реагентовП р и м е р 9. Определение аргили:2 (о-Фталевый альдегид и дитцона при рН 9,7 и соотношении реагентов треитол),1:2 (о-фталевый альдегид и дитиотреи- Оптическую плотность определяюттол). и реагент готовят по примеру 1, КонРеагент готовят и оптическую плот центрация аланина 5 10 М. Оптичесность измеряют по примеру 1. Концент- кая плотность при измерении черезрация аргинина 2 10 И. Оптическая-55,15 и 30 мин составляет 0,058,плотность составляет 0067, что при 0,048 и 0,030, что при коэффициентег- Хкоэффициенте экстинкции 6500"200 ГГ " экстинкции 2300+100 Г 1 см" отвечаетсмотвечает концентрации аргинина 20 концентрации (5,0+0,1) 10 11; (4,0+(2,00+0,06)10 М, +0,1) 10 М; (1,30,2)- 10 М,П р и м е р 10, Определение аргини- П р и м е р 14. Определение валина при рН 9,7 и соотношении реаген- на при рН 8 и соотношении реагентовтов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркап:2 (о-фталевый альдегид и меркаптотоянтарная кислота). 25 янтарная кислота).Реагент готовят по примеру 2. Оп- Оптическую плотность определяюттическую плотность измеряют по при- по примеру 1. Реагент готовят по примеру 1. Концентрация аргинина 2 10 Ы, меру 2, Концентрация валица 3 10М,Оптическая плотность 0,084 при коэф- Оптическая плотность при цзмеренииФициенте экстинкции 8200+200 Мсм 30 через 5, 15 и 30 мцн составляетсоответствует концентрации (2,00+ 0,060, 0,048 и 0,028, что прц коэффц+0,04) 10 М, циенте экстинкциц 4000+100 И смП р и м е р 11. Определение лизи- отвечает концентрации (3,0 О, 1)на при рН 9,7 и соотношении реагентов 10 5 М; (2,4+0,1) 10 Г 1; (1,40,2)1:10 (о-фталевый альдегид ц меркапто- х 10 М;янтарная кислота), П р и м е р 15. Определение валинаОптическую плотность определяют при рН 9,6 и соотношении о-Фталевогопо примеру 1. Реагент готовят смеши- альдегида и дитиотрецтола 1:0,5.ванием 0,1 мл.раствора о-Фталевого Оптическую плотность определяют поальдегида в этиловом спирте и 0,5 мл 40 примеру 1. Реагент готовят смешивараствора меркаптоянтарной кислоты нием 0,1 мл раствора о-Фталевого альв О, 1 н боратном буфере (концентрации дегида концентрацией 14,4 мг/мл впо примеру 2) и 5 мл 0,1 М боратного этаноле и 0,025 мл раствора дитцобуфера с рН 9,7. Концентрация лизина треитола концентрацией 30,8 мг/мл в110 М. Оптическая плотность 0,055 45 этиноле и 5 мл 0,1 И боратцого буферапри коэффициенте экстинкции 11100+ с рН 9,6. Концентрация валина 410 И.+300 Мсм отвечает концентрации Оптическая плотность составляет 0,060,лизина (0,96+0,03) 10 Г 1, что при коэффициенте экстинкцци 2800П р и м е р 12. Определение лизина +200 Мсм отвечает концентрациипри рН 9,7 и соотношении реагентов 50 валина (4,0.0,2) 10М.1."40 (о-Фталевый альдегид и меркапто- П р и м е р 16. Определение глициянтарная кислота). на нри рН .9,5 и соотношении реагентовОптическую плотность определяют 1:2 (о-Фталевый альдегид и меркаптбпри 340 нм через 20 мин после смеши- янтарная кислота).вания реагента и анализируемой пробы, 55 Реагент готовят по примеру . ОпРеагент готовят смешиванием 0,1 мл тическую плотность определяют по при раствора о-Фталевого альдегида в эти- меру 1. Концентрация глццина 2 10 И.ловом спирте и 2 мл раствора меркап- Оптическая плотность 0,071 при коэф -тоянтарной кислоты в 0,05 М боратном Фициенте экстинкции 6900+100 И см136 Составитель С.ХованскаяРедактор А.Козориз Техред А.Кравчук Корректор И,Зрдейи Заказ 6219/44 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изббретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 отвечает концентрации (2,00 ФО,ОЗ)ю х 10М.Таким образом, предложенный способ по сравнению с известным позволя" ет повысить точность и чувствительность (до 0,001 мг/мл) определения. Формула изобретения Способ количественного определенияф-аминокислот путем обработки анали 1477 6зируемой пробы смесью о-фталевого альдегида и тиосоединения при рН 8-11 с последующим фотометрированием полученного раствора, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и чувствительности определения, в качестве тиосоединения используют дитиотреитол или меркаптоян тарную кислоту при молярном соотношении о-фталевого альдегида и тиосоединения 1:11:10.