Способ контроля процесса ферментативного разрушения клеточных стенок микроорганизмов

О П ИСАНИИЗОБРЕТЕНИЯ 1) 639938 Союз Советских Сациагистических Республик(21) 2516642281) Ч Кт"С 12 К 100 явлено 08.08.7 присоединение 2) аявкисудврственный комитет СССР о делам изобретений(43) Опубликовано 30,12.78, Бюллетень(45) Дата опубликования описания 30.12,7 53) УДК 663.18.576.8.093.1 (088.8) крытии 72) Авторы изобретения ло,А.Т А. Коновалов, С. П, В сесоюзный научно-исс 1) Заявитель овательскии биотехническии институ ЦЕССА ФЕРМЕНТАТИВНОГО ТЕНОК МИКРООРГАНИЗМОВ Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности, а именно к способам контроля, процессов разрушения клеточных стенок микроорганизмов с помощью специфцческих ферментов литического действия.Известен способ контроля процесса ферментативного разрушения клеточных стенок микроорганизмов в условиях постоянной температуры, давления и рН с последующим измерением продуктов ферментолиза..СОднако для этого характерны большие погрешности при определении продуктов ферментолиза. 15Целью изобретения является повышение точности определения.Для достижения поставленной цели измерение продуктов ферментолиза осуществляют путем добавления щелочи и по количеству израсходованной щелочи судят о полноте разрушения клеточных стенок микроорганизмов.В основе способа лежит изменение физико-химических параметров опытной среды, в данном случае параметра рН, при протекании процесса ферментативного лизиса. Изменение этого параметра обуславливается следствием разрушения компонентов клеточной стенки микроорганизма и пере хода в опытную среду продуктов ферментативного гидролцза. Поскольку конкретеЫм условиям лизиса клеточных стенок - температура, давление, характеристика активности лцтического комплекса ц т. п. - постоянно отвечает определенная величина кислотности или параметра рН, оптимальная для протекания процесса ферментолиза, то для стабилизации этик условий (прц неизменной температуре, давлении, активности литцческого комплекса ц т, д.) требуется введение в опытную среду тцтрующего агента. Повышение интенсивности процесса фермсцтатцвцого лцзиса сопровождается образованием продуктов ферментолиза и вследствие этого повышением расхода титранта. Окончание процесса определяется по прекращению подачи титранта.Таким образом, процесс ферментолцза характеризуется постоянным по величине расходом титранта.П р и м е р 1, В примере приведены показатели процесса ферментативного лизиса микробных клеточных стенок.В реактор с мешалкой загружено 200 кг сухих дрожжей (БВК) и 1600 л водопроводной воды. После перемешиванця в течение 30 мин при 80 С смесь охлаждают до 50 С и введением 1 н. раствора щелочи (11 аОН) в реакторе устанавливают вели 54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ П АЗРУШЕНИЯ КЛЕТОЧНЫХ йсаков и Г, Ф, СухопароРасход щелочи на титрование от начала процесса, л2,13,55,06,57,1 Формула изобретения Составитель С. ВоротилоРедактор М, Дмитриева Техред И. Рыбкина Корректор О. Данишева Заказ 2209/14 Изд. Ме 770 Тираж 526 Подписное НПО Государственного комнте".а СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 чину рН 7,0, оптимальную для процесса ферментолиза, т. е. действия комплекса литических ферментов. Процесс ферментолиза начинается после загрузки в реактор 2 кг ферментного препарата с активностью 5 300 тыс. ед./г. По истечении б ч ферментолиза в контрольной пробе при микроскопировании отмечено окончание процесса разрушения клеточных стенок дроюкей. По ходу процесса ферментолиза, проходившего 10 при атмосферном давлении и температуре 50 С, осуществляли стабилизацию рН реакционной среды путем непрерывной и автоматической подачи раствора щелочи, т, е. титранта. 15П р и м е р 2. В ферментер с мешалкой загружено 100 кг сухихдрожжей рода СапГ 1 Ыа дц 11 егтпопй 1 и 800 л водопроводной воды, После перемешивания в течение 30 мин при 30 С смесь охлаждают до 50 С в водном 20 Результаты отражают функциональную зависимость между степенью массового разрушения клеточных стенок микроорганизмов и расходом титранта, служащего для стабилизации величины рН. 25Приведенные примеры показывают методическую простоту способа контроля процесса, исключение фотометрических преобразований результатов измерений и возможность реализации контроля посредст вом общепромышленных расходомеров.Таким образом, способ контроля процесса ферментного разрушения клеточных стенок микроорганизмов обеспечивает по сравнению с известными способами возмож ность количественного контроля процесса лизиса, исключающие использование фото- метрических анализаторов с характерными растворе 1 н, щелочи (ХаОН) в расворе установили величину рН 7,0, оптимальную для процесса фермсптолиза. Процесс ферментолиза начинается после загрузки в реактор 1 Гг ферментпого препарата с активностью 300 тыс, ед./г, 11 о истечении 3 ч фсрмсптолиза в контрольной пробс прн микроскопнровании отмечено окончание процесса разрушения клеточных стенок дрожкей. По ходу процесса ферментолиза, проходившего,при атмосферном давлении и температуре 50 С, осуществляли стабилизацию рН реакционной смеси посредством непрерывной автоматической подачи раствора щелочи.Показатели процесса, свидетельствующие о прямой зависимости между расходом титр апта (МаОН) и степенью массового разрушения клеточных стенок дрожжей, следующие; для них погрешГГ)стями, а таГгкс возмокность использования для контроля процесса ферментолиза простых промышленных приборов (расходо Гер). Способ контроля процесса ферментатпвного разрушения клеточных стенок микроорганизмов в условиях постоянной температуры, давления и рН с последующим измерением продуктов ферментолиза, о т л ич а ю щи й с я тем, что, с целью повышения точности определения, измерение продуктов ферментолиза осуществлгпот путем добавления щелочи и по колнчесгву израсходованной щелочи судят О полОте разруше. ния клеточных стенок микроорганизмов.