Способ выделения -пролина

11 11 639862 Союз Советских Социалистических Республик, Мурадян Г. Оганесян и В. В. Манешин енцаваиский филиал Всесоюзного научно-исследовательскогоинститута генетики и селекции продуцентов аминокислот(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕН ОЛИНА о в процессе нитастично образует- выход целевого снос Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения х.-пролина из смеси аминокислот, присутствующих в культуральной жидкости бактериального синтеза 1,-пролина. 5В патентной и технической литературе известны способы очистки Л-пролина от сопутствующих аминокислот, заключающиеся, например, в отделении Ь-пролина предварительной обработкой пикриновой кисло той или пикратами солей переходных металлов, очисткой полученных пикратов химическим путем или методом электродиализа и последующим разложением пикрата Ь-пролина. 15Наиболее близким по технической сущности к описываемому способу является способ очистки Е-пролива, заключающийся в дезаминировании сопутствующих 1,-пролину, аминокислот белкового гидролизата 20 азотистой кислотой при 60 С и солянокислым гидролизом полученных нитрозопроизводных Ь-пролина и гидрокси.-пролина. Эти аминокислоты далее отделяют пропусканием смеси их хлоргидратов через ко лонку с сульфокатионитной смолой и последующей градиентной элюцией со смолы соляной кислотой, кристаллизацией и фильтрованием.Недостатком такого оба является 30 сложность, а также то, чтрозировання 1.-пролива чся гидрокси.-пролин, ипродукта не превышает 31 О 11 О.Цель предлагаемого изобретения - повышение выхода 1.-пролива.Указанная цель достигается описываемым способом выделения 1,-пролива от сопутствующих аминокислот, заключающимся в дезаминнрованин, восстановительном расщеплении, фильтровании, обсссоливании и перекрпсталлнзации, причем куль- туральну 1 О жидкость бактериального синтеза У.-пролива подвергают дезаминпрованию при 5 - 15 С, а восстановительное расщепление образующегося нитрозо.-пролина проводят в присутствии катализаторов - хлорпдов металлов И 11 группы, например хлористого железа. 1.-пролин выделяют пропусканием раствора через сульфокатионнт КУв Н+-форме н выпариванием элюата досуха. Сухой остаток кристаллизуют дважды из этанола. Выход 65 - 70%,П р им ер 1. В литровую круглодонную колбу, имеющую мешалку, капельную воронку, обратный холодильник и термометр, помещают 20,0 мл водного раствора, содержащего 2,0 г Е.-пролива и 1 г других аминокислот, В раствор добавляют 100 мл 10 н солянои кислоты и прн 5 - 15 С мед639862 20 Формула изобретения Составитель А, Анисимов Техред С. Антипенко Корректоры; В. Дод и Е, Хмелева Редактор А. Соловьева Заказ 2209,7 г 1 зд. Ма 770 Тираж 526 Подписное НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035. Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 лепно, по каплям, добавляют раствор 4 г нитрита натрия в 20 мл воды. Массу выдерживают в течение 3 ч, добавляют 0,03 г хлористого железа и смесь кипятят в течение 10 мин. Горячий гидролизат перемешивают с 1 г активированпого угля и фильтруют, промывая осадок па фильтре , зрячей водой. Осветленный фильтрат пропускают через 60 мл смолы КУХ 8 в Н+-форме. Сорбированный 1.-пролин элюиРУют 150 мл 2 в/о-ного РаствоРа аммиака. Злюат выпаривают досуха, осадок кристаллизуют дважды из эталона.Выход 1,4 г (70% от исходного). Хроматографический анализ показывает гомогенность прооы по Ь-пролину. Т. пл. пикрата 153 9 о СП р и и е р 2. Культуральную жидкость колбочной ферментации с содержанием Ь-пролива 10 г/л и 6 г/л сопутствующих аминокислот после отделения взвешенных частиц центрифугированием, выпаривают в вакууме досуха и подвергают обработке по примеру 1,Выход хроматографнчески чистого Ь-пролина 67% от исходного.П р и м е р 3. Концентрированный элюат ионообменной сорбции Л-пролина в количестве 20 л активностью О г/л и сопутствующих аминокислот 50 г/л помещают в стальной эмалированный реактор емкостью 60 л и прибавляют 20 л концентрированной .оляной кислоты,Подкисленный раствор при перемешивании и охлаждении до 5 - 15 С дезаминируют раствором 5 кг нитрита натрия в 5 л воды. 1.-пролин из нитроформы катали- тически восстанавливают прибавлением 30 г хлористого железа (1."еС 12 2 Н 20) и кипячением в течение 15 мин, Дальнейшую обработку ведут по примеру 1. 10 Выход хроматографически чистого У.-пролип а 840 г (60 /о ) .Осуществление предлагаемого способапозволяет выделить и очистить 1.-:пролин из культуральных жидкостей бактериально го синтеза, При этом сокращается число стадий, полностью исключается образование гидрокси-У.-пролива и повышается выход целевого продукта (до 70 в/о). Способ выделения Е-пролива из смесейаминокислот путем дезаминирования, вос становительного расщепления, фильтрования, обессоливания и кристаллизации, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, дезаминирование проводят при 5 - 15 С, а восста новительное расщепление образующегосянитрозо-У.-пролина проводят в присутствии катализаторов - хлоридов металлов 7111 группы, например хлористого железа,