Способ обнаружения вирусов клещевого энцефалита в яйцекладках иксодовых клещей

Сфвз Советских Социалистических РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявяеио 240277(21) 2457319/28-13 С ПРИСОЕДИНЕНИЕМ ЗаЯВКИ Йо(23) Приоритет Государственный комитет СССР но делам изобретений н открытий.П. Мишаева и В.И. Вотяк б". .-6 )(,.Белорусский ордена Трудового Красног Зыамец.научно-исследовательский институт эпидемиологиии мик би л(54) СПОСО ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИВ ЯЙЦЕКЛАДКАХ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ ово- али- по Изобретение относится к области.медицины, в частности к вирусологии.Известен способ обнаружения вирусов клещевого энцефалита в яйцекладках иксодовых клещей путем гомогенизации яиц с последующим добавлениемфизиологического раствора, отделением надосадочной жидкости и инфицированием чувствительных животных 1Однако известный способ малоэф-.фективен,Цель изобретения - повышение эффективности способа,Это достигается тем, что надосадочную жидкость берут в объеме 1,02,0 мкл, вводят в гемолимфу голодныхиксодоных клещей, инкубируют их при20-22 С и влажности воздуха 95-9910 - 12 сут, гомогенизируют и полученный гомогенат вводят чувствительнымживотным.П р и м е р 1, Приготавливаютсуспензии из 17 яйцекладок самокиксодовых клещей (по 100 яиц из каждой яйцекладки). Каждую партию яицгомогенизируют в 1 мл физрастворас 3 сыворотки новорожденного теленка, центрифугируют 18-20 мин при2500 об/мин, надосадочную жидкость вводят парентерально н объеме 1,0- 2,0 мкл в гемолимфу 10 голодным самкам иксодоных клещей. Клещей инкубируют при 20-22 С и влажности воздуха 95-99 10-12 сут., гомогенизируют и полученный гомогенат вводят интрацеребрально белым мышам весом 6-7 г н объеме 0,03 мл. В результате исследования вирус клещевого энцефалита был выделен при первичном заражении подопытных животных н 29,6 из 17 обследованных яйцекладок.Для сравнительного анализа пр дят исследование яйцекладок на н чие вирусов клещевого энцеФалита известной методике путем трех слепых пассажей гомогената яиц на белых мышах весом 6-7 г, Вирус клещевого энцефалита выделить не удалось,П р и м е р 2. Приготавливают более концентрированную суспензию из яйцекладок клещей (500 яиц н 1 мл физраствора), зараженных нирусом кле щевого энцефалита. Яйца гомогенизируют, центрифугируют при 1500 об/мин 18-20 минут, надосадочную жидкость в объеме 1,0-2,0 мкл вводят в гемолимфу голодных иксодовых клещей,637060 формула изобретения Составитель О,. МалютинаТехредО. Андрейко Корректор Е, ПаппТираж 526 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва,Ж, Раушская наб д, 4/5 Редактор ТКолодцева Заказ 8274/49 филиал ППП .Патент, г, Ужгород, ул. Проектная,4 инкl(5 и у/ю 1 кеш,:Й 1 0-сут, пои20-22 С и влажности воздуха 95 - 99,затем гомогенизируют в физрастворе(0,1 мл Физраствора из расчета наодного кл:ща) и полученный гомогенатвводят интрацеребрально чувствительным животным, например белым мышамвесом 6-7 г. В результате исследования подобным образом 21 яйцекладкисамок клещей вирус был выделен припервичном заражении подопытных живот.ных в 43,8 случаев,Для сравнительного анализа проводят исследование яйцекладок клещейна наличие вирусов клещевого энцефалита по известной методике путем трехслепых пассажей гомогената яиц на бе-лых мышах весом 6-7 г, Вирус клещевого энцефалита удалось выделитьлишь в 19 случаев. Различия междуданными, полученными в результатесравнительного исследования яйцекладок клещей по известному и предлагаемому способам, статистически достоверны (Р0,05),.П р и м е р 3Обследовано 12яйцекладок самок клещей, из которых 5готовят концентрированную суспензию(по 1500 яиц из каждой кладки), Яйцагомогенизируют, в полученный из1500 яиц гомогенат добавляют 1, мл физраствора с 3 сыворотки теленка ицентрифугируют взвесь при 2500 об/мин18-20 мин. Надосадочную жидкость вобъеме 1,0-2,0 мкл вводят в гемолимФу голодных иксодовых клещей (10 самок клещей), инкубируют их при 2022 С и влажности воздуха 95-99о10-12 сут., гомогенизируют в фарфоровой ступке, добавляя физраствор вобъеме 0,1 мл из расчета на одногоклеща, и полученный гомогенат вводятинтрацеребрально белым мышам в объеме 0,03 мл (вес мышей 6-7 г), В результате исследования вирус клещсвогоэнцефалита был выделен в 5 случаяхиз 12 обследованных яйцекладок (чтосоставляет 41,6) при первичном за ражении подопытных животных, приэтом случаев гибели мышей от токсикоза не наблюдалось,Для сравнения было проведено параллельное исследование этих же яйцекладок на белых мышах по известной .методике, Для этого надосадочнуюжидкость из концентрированной суспензии яйцекладок (1500 яиц в 1 млФизраствора) ввели в мозг белым мышам весом 6-7 г в объеме 0,03 мл.Поистечение 3-4 сут, все подопытныеживотные погибли от токсикоза .Предлагаемый способ позволяетпроводить исследование яйцекладок ввысокой концентрации, повышает вероятность выделения вирусов клещевогоэнцефалита в 2-2,5 раза, позволяетизбежать массовой гибели подопытныхживотных от токсикоза, в 1,5 - 2 разасокращает рабочий цикл Способ проств осуществлении и доступен для любыхвирусологических лабораторий,Способ обнаружения вирусов клещевого энцефалита в яйцекладках иксодовых клещей путем гомогенизации яицс последующим добавлением физиологического раствора, отделением надосадочной жидкости и инфицированиемчувствительных животных, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения эффективности способа,надосадочную жидкость берут в объеме1,0-2,0 мкл, вводят в гемолимфу голодных иксодовых клещей, инкубируютих при 20-22 С и влажности воздуха95-99 в течение 10-12 сут., гомогенизируют и полученный гомогенат вводят чувствительным животным.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Шубладзе А .К. и Гайдамович С .Я.Краткий курс практической вирусологии, Медгиз, 1954.