Способ диагностики вирусного гепатита в

,р 1 ОИЬДНот .-"Ъ т 1".1 594965 ОПИСАН И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Сосэтскик Социалистических Республик(45) Дата опубликования описания 23.03,7 Государственный комитет Совета Министров СССР УДК 616.36-0) Заявитель инскии институт жскии в ИРУСНОГО ГЕПАТИТА) СПОСОБ ГНОСТИ нь ооласти медиц усного гепатит ики гепатита В фагах дермальь омощью антись МЕЧЕнной фЛЮО а В. пуого вовляется необходисской антисыворотй флюоресцеином,Известен также способ диагностики вирусного гепатита В путем смешения исследуемой крови с антикоагулянтом, приготовления двух проб, в одну из которых добавляют НВ-антиген, в другую - физиологический раствор, с последующей инкубацией и морфологической оценкой повреждения клеток крови (2.Однако такой способ недостаточно чувствителен,С целью повышения чувствительности по предлагаемому способу после обработки антикоагулянтом выделяют одноядерные клетки и после инкубации определяют общее число одноядерных клеток и процентное содержание в них адгезивных клеток и при уменьшении процента адгезивных клеток по сравнению с контролем более 4% диагносцируют гепатит В.Способ осуществляют следующим образом. Изобретение относится к и касается диагностики виИзвестен способ диагност тем определения в макро слоя кожи НВ-антигена с п ротки к этому антигену, цеином 11.Недостатком способа я мость получения специфич ки к НВ-антигену, мсченно которая очень дефицитна. У больного бсрут 5 мл Вснозной крови, смешивают с 0,3 мл гепар 1 гна и выделяют фракншо одноядерных клеток путем цснтрпфугироВ 2 НП 5 В градиенте плотности Верографпн 2 прн 400 6 в течение 40 мпч. Взвесь одноядерных клеток дВ 2 кды Олывают В 2 - 3 мл трис-буфера (рН 7.,2 - 7,4) цснтрпфугпрованнсм при 400 6, К осадку отмытых клсток добавляют раствор среды 199 с таким расчетом, чтобы1 О конечн 25 кон центра цп 51 Одноядерных 1 летоксоставила 10" клеток в 1,0 мл раствора. Из полученной взвеси пробы по 0,05 мл вносят в 2-е пробирки.К одной пз проб дооавляют 0,05 мл очищен 1 д ного препарата НВ-антнгена - опытная проба.К другой пробе добавляют 0,05 мл 0,85%-ного раствора ХаС - ; онтрольная прооа. Обе пробы инку бпруют 30 мнн прп 37 С. ИнкубпроВаннымп смес 51 мп заполняОт две амеры Г 020 ряева, отстаивают В камерах б 0 мпн прн 37 Си подсчитывают общее число одноядерных клсток (151 о - В Опыте, Л 4 н - В контроле), раз дельно помешают в чашки Петри, заполненные 0,85%-ным раствором Х 2 С 1, и пинцетом удаляют покровныс стекла, Камеры раздель:1 о ополаскивают 0,85%-ным раствором ХаС 1. для ВГО 11 х В Всртпкальном НОПОжс 11 пн ОсторозкНО ОНУскаОт В 112 ств 01) и сРазУ Вы 51 пз 1210 т.Опотс 1 скнванис и 1 мср провод 51 т В двх хсн.30 зурках (по 200 мл).594963 фор мула изобретения Ак = 46; М, = 120; А 46 100%М 120= 38,4 М 76 А,=31; М,=84; А А 100 о, 31 100 М 84 При А - Ао=4% у больногогепатит В.3) Ао = 17; Мо = 84;А - А . 100 о - 17100%М 84А, =32; М, - 102; диагносцируют 30 Источники информации,принятые во внимание при экспертизеКорректор 3. Тарасова Редактор Н. Хубларова Подписное Изд. Ъо 252 Тираж 708 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Заказ 415 Типография, пр, Сапунова, 2 Затем на камеры накладывают покровные стекла и оставляют на 60 мин в горизонтальном положении при комнатной температуре (18 - 20 С). Далее подсчитывают число А-клеток (адгернс), прилипших к стенкам камер в опытной и контрольной пробах (Ао и А,), и вычисляют процент числа А-клеток от общего числа одноядерных клеток (Мо и Мк) раздельно в опытной и контрольной пробах,Примеры расчета:1) Ао= 32; Мо - 106;М 106 При А - Ао=7 /о у больного диагносцируютгепатит В. 2) Ао = 22 Мо = 76 А = - 100,", == 37 ог М " 102 При Ак - Ао=2 о/о у больного с неясной кли никой заболевания отсутствует гепатит В,Предлагаемый способ является высокочувствитсльным и позволяет в 96%-тах поставить правильный диагноз у больных при поражениях печени неясной этиологии; способ техни чески несложен и нетрудоемок. Способ диагностики вирусного гепатита В 15 путем смешения исследуемой крови с антикоагулянтом, приготовления двух проб, в одну из которых добавляют НВ-антиген, в другую - физиологический раствор, с последующей инкубацией и морфологической оценкой 20 повреокдения клеток крови, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения чувствительности способа, после обработки антикоагулянтом выделяют одноядерные клетки и после инкубации определяют оощее число однояде рных 25 клеток и процентное содержание в них адгезивных клеток и при уменьшении процента адгезивных клеток по сравнению с контролем более 4/о диагносцируют гепатит В. 1. Авторское свидетельство СССР Мо 513687,кл. А 61 В 10/00, 1975.35 2, Авторское свидетельство СССР р 1 оо 438418,кл. А 611, 23/00, 1974.