“штамм (пигментообразующая разновидность “11-р”) используемый для изготовления диагностических биопрепаратов

1 ц 1 70641 ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сюаз Сееетскик Социалистических Реслуоликударственнык комитет ета Министров СССР Опубликовано 30.08.77 Бюллетень32 16-002,525088.8) о делам изобре и открытий та опубликования описания 19,0 2) Авторы изобретени 1) Заявителин, М, М, Нуралиев, А, К. Копеечкина и М. М. Нуралиеврдена Ленина ветеринарный институт им. Н, Э, Бауманадно-Казахстанский сельскохозяйственный институт Х. Х, Абдулл Казанский о и Зап(ПИГМЕНТООБРАЗУЮЩАЯ РАЗНОВИДНОСТЬ 11-Р),СПОЛЬЗУЕМЪЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСГИЧЕСКИ БИОПРЕПАРАТОВпцгп рагаце биологиче зиологические своиства. ра на твердой, иногда на дуцирует оранжевый пиг. Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой новую разновидность возбудителя паратуберкулеза овец, выделенную из патологического материала больной овцы и используемую в качестве антигена для приготовления паратуберкулина и диагностикумов для постановки реакции связывания комплемента (РСК).Известно, что для аллергической диагностики крупного рогатого скота и овец применяется туберкулин для птиц или же паратуберкулин, приготовленный из возбудителя пара- туберкулеза крупного рогатого скота 11.Основным недостатком указанных диагностических препаратов является слабая специфичность, а следовательно, и эффективность для диагностики паратуберкулеза овец.Из литературы также известно выделение и описание культур возбудителя паратуберкулеза овец, обладающих пигментообразованием 21, Однако в процессе пересевов такие культуры теряют свойство пигментообразования, и в связи с этим свои вирулентные и антигенные свойства, и потому сведений в литературе о возможности изготовления из этих культур микроорганизмов эффективных диагностических препаратов для овец нет,Целью изобретения является шамм МцсоЬас 1 епцтп рагацЬегЕц 1 ез 1 з очз (разновидность 11-Р), обладающий признаком высокой вирулентности - пигментообр азова н нем, устойчивыми культурно-морфологическими и специфическими признаками, стойкими антигенны ми свойствами при использовании его в качестве аллергена для диагностики паратуберкулеза овец.Штамм выделен из патматериала больныховец из неблагополучного по паратуберкулезу 10 хозяйства в 1967 году.Выделенный штамм МцсоЬас 1 еЬег 1 ц 1 ез 1 з оказ имеет следующиские характеристики.Морфологические признаки. Маленькая кис лото-спирто-антиформиноустойчивая палочка, длиной 0,5 - 1,2 и шириной 0,2 - 0,5 мк, растет в аэробных условиях, неподвижна, спор, капсул не образует, полиморфна. В мазках из пораженной ткани палочки отличаются ха рактерным расположением в виде кучек,гнезд, реже попарно. Бактерии паратуберкулеза не окрашиваются водными растворами анилиповых красок, хорошо окрашиваются по способу Циль - Нильсена. При окраске по 25 Грам - Муху в клетках бактерий отмечается зернистость.Культурально- фиПигментная культужидкой среде про5560 3мент. Факультативный аэроб. На плотной кровяной среде рост появляется через 30 - 40 дней. На поверхности кровяной среды с добавлением 5% микобактерий флей и 2% птичьего туберкулина появляется нежная наподобие слизи колония с желтоватым оттенком и ровной поверхностью. На жидких питательных средах Данкина, Мазур - Боева рост получен на 30 - 40 день в виде нежных мелких бело-серых островков. Рост 3 - 4 и последующих генераций отмечен на 17 - 23 день. На жидкой питательной реде рост представляется в виде нежных мелких бело-серых островков, которые заметны невооруженным глазом. Затем островки сливаются между собой и образуют на поверхности среды темно-серую пленку, которая при малейшем встряхивании разрывается и падает на дно колбы. По мере роста пленка утолщается, поверхность ее становится неровной, бугристой, цвет несколько изменяется и через 2 месяца принимает оранжевую окраску.Биохимические свойства. Молоко не свертывает, желатину не размывает, кровяную сыворотку не изменят, практически не ферментирует углеводы.Вирулентные свойства. Вирулентность штамма определена следующими показателями; при подкожном заражении в дозе 1,5 - 2,0 мл одномиллиардной взвесью морские свинки, кролики и овцы в течение 5 - 6 - 11 - 16 месяцев не имели ни местных, ни общих признаков заболевания,У экспериментально зараженных овец установлено явление местной аллергической реакции на 30 - 45 день после заражения в ответ на внутрикожное введение аллергена из исходной культуры в обойме 0,2 - 0,3 мл.Реакция выражалась появлением тестообразной припухлости, увеличением складки в несколько раз по сравнению с нормальной, повышением местной температуры.Это свойство исчезает через 3 - 4 пассажа с интервалом 1 - 1,5 месяца, на искусственных средах.Антигенные свойства. Из пигментной культуры изготовлен антиген для постановки реакции связывания комплемента с положительной паратуберкулезной сывороткой, установлен титр 1: 100 при разведении положительной сыворотки 1:5, 1:10, 1:20. Были поставлены контроли с нормальной и положительной сыворотками с антигеном и без антигена, а также контроль гемсистемы,Показания всех контролей правильны. Формула изобретенияШтамм МцсоЬас 1 ег 1 цгп рага 1 цЬег 1 цез 1 з оиз (пигментообразующая разновидность 11-Р), используемый для изготовления диагностических биопрепаратов. Хранится на кафедре физиологии и биохимии животных Западно-Ка 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 захстанского сельскохозяйственного институтаКазахской ССР.Морфологические признаки. Тонкие короткие палочки, колебание длины в пределах0,5 - 1,2, ширины - 0,2 - 0,5 мк, грамотрицательные, неподвижные, спор и капсул не образуют. В мазках из культур тонкие палочкирасполагаются кучками в виде отдельныхгнезд.Культурально-физиологические признаки.Растет на специальных плотных яичных средах с добавлением фактора роста, напримерэкстракта микобакерий флей и других притемпературе 36 - 38". Из жидких питательныхсред оптимальными для данного штамма являются среды Данкина и Мазур - Боева.Факультативный аэроб, рост на плотныхпитательных средах появляется на 30 - 40 сутки, колонии в виде слизистого налета, желтооранжевого оттенка, с ровной поверхностью,не очерченными краями. На жидких питательных средах растет на поверхности в видетемно-серых островков, которые через 8 - 10суток сливаются, образуя впоследствиисплошную пленку с морщинистой поверхностью с характерным оранжево-бурым оттенком, На картофельной среде растет в видеслизистого налета с оранжевым оттенком.Биохимические свойства. Молоко не свертывает, желатину не разжижает, свернутукбычью сыворотку не изменяет. В среде Данки.на с добавлением углеводов и многоатомныхспиртов практически не проявляет ферментативные свойства, за исключением глицери.на,Вирулентные свойства. В условиях экспериментального заражения не установлены клинические признаки у лабораторных животных.Антигенные свойства. Экстракты 2-х месячныхкультур МцсоЬас 1 ег 1 цт рага 1 цЬег 1 цез 1 з овз,используемые в качестве антигена для постановки РСК, выявляют у экспериментальнозараженных и клинически больных паратуберкулезом животных в 90 - 95% случаях вразведении сыворотки 1: 5 - 1: 10.Аллерген, изготовленный из данного штамма по внутрикожной пробе у инфицированных лабораторных животных и клиническибольных овец дает четкую положительную реакцию. Источники информации, принятыево внимание при экспертизе1. Ветеринарное законодательство. М., Колос, 1972, т. 1, с. 227, 640.2. Нуралиев М. М. и др, Методы выделения культуры паратуберкулеза на различных питательных средах. - Диагностика, профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных. Научные труды Саратовского сельскохозяйственного института, 1974, т. 15, с. 111 - 114,