Способ получения уратоксидазы

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДОЕЛЬСТЬУ Союэ СоветскихСоциалистическихРеспублик(43) Опубликовано 25.07.77 Бюллетень27 осударствеииый комитетСовета Мииистроа СССРпо делам изооретеиийи открытий 53) УДК 663,1Е. Ли иро таминный институи(Вх соответственно2,5% по весу сухвыделением ферферментационной ср равных их вешесмента. в с ы,Гидроли В 1,0-2,5 (посухим вещества0,2-0, 350,01-0,150,01-0,0701 01-Оф 07 МочеваК ф. РО 4мьо 4КС 4 ислота Дсостад сре Сиодят микроэлементь став посевно еды, вес. %:1-2 (по сухвеществам)0,01-0,07, Си 0 икроэлементь 25 Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биологически активных веществ, выращенных на жидкой питательной среде, например уратоксидазы измицелия Ас 6 лоеусев внес(ез 31 З,Известен способ получения уратоксидазы,предусматривающий культивирование 4 с 1 Ьоеувеа Ьресео 313-152 в аэробных условиях наферментационной среде, содержащей мочевуюкислоту и минеральные соли, с последующимвыделением феуМента 11,С целью повышения выхода и активностифермента по предложенному способу в посевную и ферментационную среды вводятгидролиэат белкововитаминного концентрата в количествах соответственно равных1,0-2,0% и 1,0-2;5% по весу сухих веСпособ осуществляют следующим образом.Культуру Ас 6 котусеа аресеа 313-152 выращивают в аэробных условиях на посевной и ферментационных средах, содержащих м(- чевую кислоту, минеральные соли и гидролизат белково-витаминного концентрата (БВК) П р и м е р 1. Посевную культуру 4 с 1 отсаа ареьев 313-152 вырашиввюч на среде, содержащей 1% гидролизате БВК,565935 Гидролизвт БВК 1,5(по сухимвеществам)0,30,10,050,05 Мочевая кислотаКНРО 4МРВО 4КСО Фидролизвт ЪЗ К Мочевая кислота 1,5 /по сухимвеществам)0,3 0,10,050,05 У ьЦНИИПИ Заказ 2318/17 Тираж 541 Подписное филиал ППП Патентф, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 зВыращивание ведут в вэробных условияхопри 28 й 1 С в течение 24-28 чвсГотовый посевной материал (5 об.Ъ) переносят в ферментационную среду состава, вес, 7 Среда также содержит,5 мг/л Ре О, 1 мг/л С 0 504 и воду дистиллированную, рН среды (6,8-6,9) устанавливают до стерилизации.СтерилизациюЬроводят ъри 0,5 вти, 30 мин, фдруйнФарию - 12 - 16 час, Полученный мицелий 8 одержит уратоксидазу с активностью 8 - 20 ед, нв 1 г влажного веса клеток и 150-400 ед, в расчете на 1 л культуральной жидкости.Удельная активность экстракта составляет 0,25-0,6 ед, на 1 мг белка или 40-90 ед, на 1 г сухого мицелия.ЬП р и м е р 2, Гидролизвт БВК готовят.из 30 г сухих дрожжей, которые вносят в 100 мл 1 н, НС 1, Гидролиз проводят 30 мин при 0,5 вти, Затем объем суспензии доводят до 300 мл водой н фильтруют,,Оля приготовления среды используют фильтрат гидролизвтв БВК.Посевной материал готовят следующим обрезом. Суспейзию спор с 7-.14 - суточной культурыАс 6 иоисев ьресеб 313-152), з выращенной нв овсяной вгвризоввнной среде, переносят в 750 мл колбу со 100 мло . посевной среды состава, вес. /о; Гидролизвт 1,0 (по сухимвеществам)КН,р 04 0,1МУ ВО 0,5КСР 0,05Среда также содержит 5 мг/л Ге 0, и Х мг/л 10 В 04 . рН среды устанавливают до стерилизации 1 н,"КОН (6,8-6,9),Стерилизацию проводят 30 мин при0,5 ати.Посевную культуру вктиномицета выращивают в аэробных условиях на качалке при 220 об/мин в течение 24-28 час при 28 й 1 С.5 мл культуры переносит в 100 мл ферментационной среды состава, вес.7 о: 5 В состав среды также входит 5 мг/л РеБ 04,1 мг/л Си 50 и вода дистиллированная.рН среды устанавливают до стерилиза. ции 1 н, КОН - 6,8-6,9. Стерилизацию проводят 30 мин при 0,5 вти.ферментвцию ведут в 750 мл колбах со 100 мл среды в вэробных условиях при встряхивании на качалке при 220 об/мин .цри 28+1 С.+ оЧерез 12-16 час ферментацию прекращают, мицелий отделяют от культуральной жидкости фильтрованием, промывают водой и разрушают ультразвуком на установке МЕ 100 в течение 4 мин.При этом активность уратоксидазы в бесклеточном экстракте составляет 0,25- 0,6 ед, на 1 мг белка или 8-20 ед, нв 1 г влажных клеток.Последующее освждение сульфатом аммония дает частично очищенный экстракт с активностью 3-4 ед/мл, Фермент уратоксидезы квтализует окисление мочевой кислоты и может быть использован в диагностике, а в высокоочищенном состоянии - для лечения заболеваний, связанных с нарушением пури- нового обмена. формул а.йзо бретения Способ получения урвтоксидазы, предусматривающий культивирование 1 с 6 иоесеб прес(ее 313-152 в вэробных условиях нв посевной и ферментвционной средах, содержащих мочевую кислоту и минеральные соли,с последующим выделением ферменте, о тл и ч в ю ш и й с я тем, что, с цельюповышения выхода и активности фермента, впосевную и ферментационную среды вводятгидролизвт белково-витаминного концентрата в количествах, соответственно равных1,0-2,07 о и 1,0-2,5% по весу сухих веществ.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Авторское свидетельство СССР457723, кл. С 12 Э 13/10, 01.09.74,