Способ оценки состояния печени

Союз Советских Союрал исти цеских Республик(23) Приоритет аоударстаенныи комитетСааата Миниотроа СССРпо делам изобретенийи открытий публиковано 25,02.77. Бюллетень53) УДК 616.36(088.8)(4 б) Дат бликования описания 10.05,77 2) Автор изобрет В, С. Сергее 71) Заявитель рой Московский государственный ордена Ленина медицинский ин нм, Н. И, Пирогова 54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ Изобретение относится к облаьной медицины,Известен способ оценки состоя ен. ти эк печени путем ителя, взятия ведения в кровоток витального еля и измерения са ткани 11,ечивает высокои овышение точ 10 ости оценки состояния нече Это достигается тем, что перед трансплантацией, в воротную вену вводят 0,3% - 1,0% - ный раствор нейтрального красного в количестве 2 мл на 10 г веса печени, через 2 - 2,5 мин забирают кусочек 1 н печени, из одной части экстрагируют краситель, а другую подвергают криомикроскопическому и гистологическому исследованию, измеряют на гистологическом препарате соотношение заполненных и незаполненных красителем зон микроциркуляции, определяют содержание сорбированного красителя в отдельных клетках, а сдвиг рН клеток определяют по смещению максимума в спектре поглощения красителя.Способ осуществляют следующим образом,кусочка ткани, экстракции красит количества красителя в единице ве Однако этот способ не обесп точности оценки состояния печени. Целью изобретения являетсяВ афферентный сосуд (воротную вену) переживающей печени с током крови или перфузата вводят нейтральный красный. Важным условием является введение точного количества этого красителя (0,5%-ный раствор в количестве 2 мп на 10 г веса печени), так как это создает возможность количественной оценки изучаемых параметров, Через 2 - 2,5 мин, вырезают небольшой кусочек печени и делят его на две части. Одну замораживают в жидком азоте, другую помещают в состав, экстрагирующий краску, адсорбироватптую печенью. Из замороженного кусочка готовят срезы для гистологического и цитофометрического анализа, определения рН и микроциркуляции крови. Состав с экстрагированной краской колориметрируют (с целью выявления показателей сорбционной способности клеток и расчета суммарного объема кровоснабжаемдй ткани).На гистологическом препарате участки, где в результате переживания развился блок микроциркуляции, остаются неокрашенными, Определяют соотношение окрашенных и неокрашенных площадей и получают картину эффективности микроциркуляции, которая зависит от продолжительности и тяжести перенесенной ишемии. Регистрируют цито547209 35 Составитель С. МалютинаТехред М. Ликович Корректор Н. Золотовская Редактор А. Бер Тираж 677 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам нзо бретеннИ н открытиИ 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Заказ 909/83 Фнлнзл ППП " Патент ", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 спектрофотометрически количество красителя, сорбированного печеночными клетками, и определяют их сорбционную способность. Микроскопируют окрашенный нейтральным красным гистологический препарат и выявляет морфологические наруше- б ния структуры клеток, связанные с перенесенной ишемией, Определяют смещение положения максимума в спектре поглощения красителя на препарате и устанавливают сдвиг рН в клетках,П р и м е р. Применение предлагаемого способа 1 О для установления времени тепловой ишемии печени, У белой беспородной крысы путем перевязки воротной вены и печеночной артерии воспроизводят тепловую ишемию печени. Через неопределенное время (в пределах 40 мин, ) лигатуру снимают, в 15 воротную вену вводят 0,5 о ный раствор нейтрального красного (2 мл на 10 г веса) печени. Время введения 2 мин. Из печени вырезают кусочек весом 0,8 - 1,0 г. Последний делят на две части. Один помещают в 5 мл раствора 70 спирта, подкисленного (2 мл на 100 мл) серной кислоты, экстраги.рующего нейтральный красный. Экстракт колориметрируют на колориметре ФЭКМ, фильтр 6 (длина волны 540 н,О10), контроль - дистиллированная вода, 25Оптическая плотность измеряемого раствора 0,93. Затем кусочек печени, из которого была экстрагирована краска, высушивают в термостатеопри 70 С в течении 2 час и после этого определяют количество экстрагированного красителя на 1 г 80 сухого веса ткани. Сухой вес ткани 0,128 г 0,12 8 ------ 0,93 1 0,930 ------ ХХ==Т 2 б0 12871Количество поглощенного красителя на изучаемом сроке ишемии печени 7,26, что составляет 141% по сравнению с сорбцией красителя печенью в контроле и соответствует 15-минутной ишемии.Из второго кусочка после его замораживания в жидком азоте готовят срезы толщиной 5 р. При стандартных условиях увеличения фотографируют препараты, а затем планиметрируют, определяя площадь окрашенных зон печени. В данном случае они составляют 11,3%, что соответствует 16-ой минуте ишемии органа. На этом же препарате цитоспектрофотометрически определяют положение максимума в спектре поглощения красителя клетками. Последний равен 514 и,О, что соответствует 15 - 16-ой минуте ишемии.Осуществление предлагаемого способа занимае меньше времени, что позволяет его применять для получения экспресс - информации о жизнеспособности печени в условиях ее консервации с целью трансплантации, Предлагаемый способ менее трудоемок, он более экономичен, посколькуне требует применения дорогостоящих реактивов, Предлагаемый способ позволяет количественно определить объем некровоснабжаемых зон микроциркуляции, получить данные о продолжительности перенесенной ишемии печени, оценить такие показатели состояния печени, как гистологические сдвиги, сорбиционную и десорбционную способность клеток печени, сдвиг рН. Формула изобретения Способ оценки состояния печени путем введения в кровоток витального красителя, взятия кусочка ткани, экстракции красителя и измерения количества красителя в единице веса ткани, о т л ич а ю щи й с я тем, что, с целью повышения точности оценки перед трансплантацией в воротную вену вводят 0,3% - 1,0 о.ный раствор нейтрального красного в количестве 2 мл на 10 г веса печени, через 2 - 2,5 мин забирают кусочек печени, из одной части экстрагируют краситель, а другую подвергают криомикроскопическому и гистологическому исследованию, измеряют на гистологическом.препарате соотношение заполненных и незаполненных красителем зон микроциркуляции, определяют содержание сорбированного красителя в отдельных клетках, а сдвиг рН клеток определяют по смещению максимума в спектре поглощения красителя. Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе: 1. Журнал "Патологическая физиология и экспериментальная терапия",1960, Х 3 (прототип),