Способ количественного определения производных рибонуклеозидов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(61) Дополн льное к авт. свид.ву 2) Заявлено 14,03,74 (21) 2003688/04присоединением заявки51 Кл.01 Я 21/2401 Я 31/08 Государственный комитет Совета Мнннстрое СССР оо делам изобретений н открытий(45) Дата опубликования оп Авторыизобретен шкин, Ю, Г. Пляшкекч и Э,.И. Будовски В,и 71) Заявит(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОП ПРОИЗВОДНЫХ РИБОНУКЛЕОЗИ В 2 4 -дайсилглицина. Смесь выдерживали ви гтечение 24 час, при 20 С, Дальнейшее раз. ,деление флуоресцируюших производных нуклеозидов и их детектирование проводили стандартными методами,П р и м е р 1, Анализ флуоресцирующих производных рибонуклеоэидов.К 10 иО 1 водного раствора, содержащего 2 10 моль перйодатокисленного аденозина, гуанизина, уриднна, цитидина или их смеси, добавляют.501 0,3 М натрийацетатного буфера (рН. 5,О) и 0,5 мл водно- спиртового раствора, содержащего 8.10 моль гидразида то -дансилглицина. Реакционную смесь выдерживают в течение и 24 час при 20 С.Анализ флуоресцируюших производных рибонуклеозядов проводят методом тонко ,слойной хроматографии на пластинке с полиамидным слоем, алюент - четыреххлористый углерод: уксусная кислота: ацетон (4: ; 1:4).Получают Гидразяд следуюшие -дансилг Изобретение относится к способам анализа в химическом и микробиологическом про.изводстве рибонуклеоэидов и 5 -рибонуклеозидов, клинического анализа и диагностики заболеваний, связанных с нарушением мета- о болиэма нуклеиновых кислот и их производ;ных, и нуклеотидного анализа в научных ис,следованиях.Известен способ определения рибонуклес зидов, основанный на поглощении лучей в 10 ультрафиолетовой области. Для указанного способа характерны длительность определения и сложность аппаратурного оборудования.С целью упрощения способа, предлагает 15 ся пробу вещества окислять иодной кисло- той и полученный продукт обрабатыватьгидразидом Я -дансилглицина с последующим хроматографическим разделением флуоресцируюших продуктов.20Способ анализа заключается в том,чток водному раствору, содержашему перйодатокисленные . производные рибонуклеоэидовдобввииии натрийвиетатиыв бу(ар и воатоспиртовой раствор, содержащий гидразид ф 5 айиа.йсес-ки,:,рЕщ,1 ен-,д,451870Флуоресцирующее производноеаденозина 0,85уридина 0,77цитидина 0,38гуаниэица 0,2611 утем ступейчатого разбавления реакционной смеси с последуюшим ее хроматогра-,фическим анализом установили, что при визуальном детектировании,"используя ручнойультрафиолетовый осветитель на 365 ммкиз отечественного набора КТХ-3, мож-но -ино работать с 10 - 10 моль исследуемого вещества,П р и м е р 2, Анализ флуоресцируюших производных рибонуклеозидов.К 10 М водного раствора, содержащего 1,5 10 моль перйодатокисленного аденозина, аденоэин-монофосфата аденозиндифосфата и аденозиптрифосфата или их смеси, добавляют 5 Р 0,3 М натрийацетатного буфера (р 1 5,0) и О 5,01 водно-спиртового раствора, содержащего 8 10 моль ги дразида М -дансилглицина. Реакционнуюосмесь выдерживают при "20 С в течение 24 час. 2Анализ флуоресцируюших производныхрибонуклеозидов проводят методом хромато,графии на пластинке с целлюлозой (ГЭИ),,элюент 1 М млористый литий, предварительно удаляя избыток гидраэида 1 Я -дансилглицина промывкой метиловым спиртом,Получают следующие значения ВГидраэид,Ю -дансилглицина 0,96Флуоресцирующее производноеаденозина 0,77аде пози н-монофосфата 0,58аденозиндифосфата, 0,27аденозинтрифосфата 0,09Детектирование пятен проводили визуально, используя ультрафиолетовый осветительна 365 ммк,изобретенияФ - р м ул аСпособ количественного определения производных рибонуклеозидов, о т л и ч а юш и й с я тем, что, с целью упрощения, способа, пробу вещества окисляют иодной кислотой, полученный продукт обрабатывают гидразидом й -дансилглицина с последующим хроматбграфческим разделением флуоресцируюших продуктов.Составитель В, Гладков Редактор О, Кузнецова Техред С. Габовда Корректор И. МельниченкоЗаказ 2678/285 Тираж 1029 ПодписноеШИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд. 4/5филиал 111 "1 атент", г, Ужгород, ул. 11 роектная, 4