Способ определения вида антибиотика

о и д-яи е изоьеетения дц 534035 СОюз Ссвотских Соеалистичесних Республик(22) Заявлено 26.08.74 056713/1 вкиисоединением арственныи комитет 15.05(23) ПриоритОпубликовано Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий"4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА АНТИБИОТ да антибио- тибиотикоусиспользлют 5 Изобретение относится к области медицинской микробиологии.Известен способ определения в;тика, по которому в качестве антойчивых тест-микроорганизмовхромосомные мутанты.Однако такой способ трудоемок и длителен, кроме того, невозможно получить мутанты, устойчивые более чем к двум антибиотикам.С целью упрощения способа и возможности 10 определения вида антибиотика в присутствии других антибиотиков по предлагаемому способу в качестве тест-культур используют рекомбинаты с эписомной устойчивостью к антибиотикам. 15Для получения коллекции рекомбинантов тест-микроорганизма со всеми необходимыми сочетаниями генов антибиотикоустойчивости в К-факторах 1 мл суточной бульонной культуры донора, например, энтеробактерий с 20 К-фактором и реципиента, например Езс)тег 1 с)т 1 а со 11, вносят в колбу Эрленмейера с 10 мл бульона Хоттингера (рН 7,4 - 7,6) и инкубируют при 37 С в течение 1 - 2 час. Затем 0,1 мл коньюгационной смеси бактерий вно сят на поверхность селективной среды в чашке Петри, растирают шпателем и инкубируют при 37 С в течение 18 - 24 час. В качестве селективной среды используют среду Эндо, содержащую 70 мгк/мл налидиксовой кисло ты, к которой устойчив микроорганизм - реципиент и 50 в 1 ед/мл одного из антибиотиков, соответствующего генам антибиотикоустойчивости К-фактора. Колонии рекомбинатов пересевают секторами на среду Эндо, содержащую раздельно по 50 - 100 ед,мл антибиотиков, соответствующих данному К-фактору, с целью уточнения вила генов антибиотнкоустойчивости, полученного К-фактора и проверки чистоты культуры.Далее пересевают культуру в мясо-пептонный бульон для последующего изучения уровня чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений и в полужпдкий (0,4% ) мясо-пептонный агар под слоем стерильного вазелинового масла для хранения культуры. Созданную коллекцию тест-культур можно использовать многократно.Способ осуществляется следующим образом,Исследуемый материал содержащий антибиотики, вносят в определенном количестве в расплавленный и охлажденный до 45 С питательный агар и разливают в стерильные чашки Петри (1 чашка на 8 - 16 штаммов).После застывания поверхность питательной среды засевают штрихами по одной стандартной петле суточной бульонной культурой всех штаммов тест-культур и инкубнруют при 37 С в течение суток. По сочетаниям роста н от514015 Формула изобретения БиУ анлрба агринаа а аа.Леауемам субе тпратпе Ламери тпестп- и лет р 2345 в 7 8 я 7 ооугпдсбюпгиигсг 1 гглгдВгБг 7 гБгюпе а адепте пеппино тпесо-апып по генам анпв астана стпеана папами Р анга к Т Л С Я К ТЛ ТС ТК 7 А ЛС ЛКЛА СА СК АК ТЛСТЛА ТЛ ТСА ТС 7 АК СА ЛСК Я СЯКТЛСАТЛС ТП СК С ЛС К Моронтпгрцстпика растпа тстп-нлыпур приутпсю Ы разлиньи антпи цатптпгаTЛСА К лс к тлск АК Л К лстг 7 ЮК 7 лс Ак лса е прап где 7 петпраииклинЛлВоиице-, С-счрептпаиицьц -ампоцпяеин,К-наномьцин Составитель Г. СмирноваРедактор Н. Аристова Техред 3. Тараненко Корректор Н, Аук Заказ 1306/7 Изд. Лов 1330 Тираж 575 Подписное Ц 1-ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская нао д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 сутств 1 и роста тест-культур определяют с помощью таблицы виды антибиотиков в исследуемом материале. При этом для некоторых антибиотиков ввиду общности механизма устойчивости тест-культур к антибиотикам близ- о кого химического строения определяют их групповую принадлежность, например тетрациклины, пеициллиназоустойчивые пенициллины, аминогликозиды (канамицин, неомицин, мономицин) . Чувствительность метода соот ветствует уровню видовой чувствительности к антибиотикам микроорганизма, использованного для создания коллекции тест-культур.П р и м е р. 20 мл мочи больного, подвергающегося натибиотикотерапии, вносят в колбу 15 с 80 мл охлажденного до 45 С питательного агара. Смесь разливают в 4 стерильные чашки Петри. После застывания и просушивания питательной среды ее поверхность засевают штрихами суточными бульонными культура ми 31 штамма рекомбинантов тест-микроорганизма Еэс 11 ег 1 с 1 т 1 а со 11 51 по 8 культур на чашку. Через 24 часа инкубации при 37 С на поверхности среды вырастают штаммы тест- микроорганизмов10, 16, 22, 23, 25, 27, 30, 31.В таблице приведены данные для определения вида антибиотика в исследуемом субстрате. По этой таблице находят, что рост указанных штаммов при угнетении роста остальных штаммов коллекции соответствует наличию в питательной среде левомицетина и стрептомицина. Способ определения вида антибиотика по сочетанию роста и угнетения роста антибиотикоустойчивых тест-культур при их инкубации в присутствии исследуемого материала, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и обеспечения возможности определения вида антибиотика в присутствии других антибиотиков, в качестве тест-культур используют рекомбинанты с эписомной устойчивостью к антибиотикам.