Способ выделения и очистки -амилазы из поджелудочной железы

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕУЕЛЬСУВУ Сеюэ Советских Социииотичеся".х Расстели(т(1,) ЧЬЯ 5 61) Дополнител авт. сви -ву аявлено 10,10.73 ( 6321 28-1 М. Кл, С 07 б 7/02 присоединением заявкиГосударстваииый комитет Совета В иистров СС:Р(23) Приорит 6, Бюллетень77.15,0 088.8) елец изооретоиийи открытий ликов ан Дата опубликования описания 25,05.76(72) Авторы изобретения Г. С. Парр, В. П. Комов, Н. Д В, Л. Констан вод медицинских препаратов производственном объедин(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ 1.-АМ ИЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Ы П р и м е р. Мороженую свиную панкреазу измельчают на волчке с диаметром отверстий решетки 2 мм. Измельченную железу порциями загружают в емкость с охлажденным ацетоном в соотношении 1: 5.Операции обезкиривания и обезвоживания ведут при нулевой температуре в течение шести часов, осуществляя каждый час перемешивание по 15 мин. Осадок выдерживают 3 - 4 ч, после чего сифонируют ацетон. Железу заливают новой порцией ацетона в соотношении 1: 3. Такую обработку повторяют трижды.Обезжиренную железу отпрессовывают на гидравлическом прессе и сушат тонким слоем под вакуумом при 18 - 20 С. Высушенную железу измельчают на шаровой мельнице. В итоге получают 25 г сухой панкреазы. Затем следует непосредственное выделение 1 -амилазы и ее очистка. Для этого полученные 25 г сухой железы экстрагируют 0,02 Н раствором ацетата кальция в соотношении 1: 10 в течение 16 ч при температуре от 0 до 3 С. Остаток отделяют фильтрованием и суспендируют в 0,02 и. растворе ацетата кальния (в соотношении 1: 3 к весу сырья) и подвергают повторной экстракции в течение 2 ч при 3 С. Полученный экстракт фильтруют. остаотпрессовывают на гидравлическом престение относитс а именно к сп дочной железы 10 от пу- исталток 30 се, Изобре я к производству ферментов, особам выделения из поджелу 1.-а мил азы и ее оч истки.Известен способ выделения 1.-амилазы из поджелудочной железы крупного рогатого скота с последующей очисткой. Он заключается в том, что измельченную и обезвоженную железу обрабатывают раствором, содержащим ионы Са, в полученный раствор добавляют ацетон и осадок отделяют центрифугированием. Затем осадок суспендируют в минимальном количестве воды и диализуют против проточной воды.Отдиализованный раствор осветля тем центрифугирования и проводят кр лизацию.Предлагаемый способ обеспечивает повышение чистоты 1.-амилазы за счет того, что диализ раствора осуществляют против фосфатного буфера, полученный диализат дополнительно обессоливают на анионите в рН-форме в статических условиях, а затем обрабатывают кизельгуром.Кизельгур удаляют фильтрацией, а полученный раствор лиофильно высушивают.Из растворов, содержащих ионы Са, для обработки поджелудочной железы используют ацетат кальция, расходуя его при соотношении 1: 3 к весу поджелудочной железы. Сидорова, С. В. Манойлов,инов и О, В. Чайкари Ленинградском орденании мясной промышленнос506595 Составитель М. АндрееваРедактор Л. Василькова Техред Т. Писакина Корректор М, Лейзерман Заказ 1090/9 Изд,1208 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 3Экстракты объединяют и фильтруют через сукно при 3 С. Из полученного фильтрата осаждают балластные белки, охлаждают ацетоном, конечная концентрация которого равна 47%. После отделения балластных веществ доводят концентрацию ацетона до 69%. Выпавший осадок, содержащий амилазу, отделяют на центрифуге при 0 С и промывают 90- ным спиртом, удаляя ацетон. Осадок амилазы растворяют в воде при соотношении 1: 2, доводя рН до 8,0 путем добавления 0,01 н раствора едкого натрия, а затем диализуют против фосфатного буфера в течение 8 ч при 4 - 5 С.Диализат отделяют от выпавшего осадка и обессоливают на анионите ЭДЭП в ОН- форме в статических условиях при концентрации смолы 10 г/л. После отделения смолы фильтрацией под вакуумом раствор обрабатывают кизельгуром из расчета 8 г/л. Затем кизельгур отделяют и полученный прозрачный раствор амилазы фильтруют на асбесто-целлюлозных фильтрах, Отфильтрованный раствор замораживают при - 60 С и лиофильно высушивают при конечной температуре в продукте +25 С. В результате получают 350 - 400 г сухого препарата с активностью 5 - 7 тыс. ед/кг. При хранении в комнатных условиях в течение 3 лет он практически не теряет активности. Такой препарат амилазы может найти применение не только для проведения научно-исследовательских работ, но 5 и для медицинских целей. Формула изобретения1, Способ выделения и очистки 1.-амилазыиз поджелудочной железы, предусматриваю 10 щий экстракцию измельченной и обезвоженной поджелудочной железы раствором, содержащим ионы Са, осаждение ее из экстракта, например, ацетоном, отделение полученного осадка, растворение его с последующим15 диализом раствора, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения чистоты Е-амилазы,диализ осуществляют против фосфатного буфера, полученный диализат дополнительнообессоливают на анионите в рН-форме в стати 20 ческих условиях, а затем обрабатывают кизельгуром, удаляют последний, например,фильтрацией и полученный раствор лиофильно высушивают,2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем,25 что из растворов, содержащих ионы Са, используют ацетат кальция, при этом его вводят при соотношении 1: 3 к весу поджелу.дочной железы.