Способ выделения винкристина

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ п 1) 499778 Союз Советских Социалистических Республик61) Дополнительный к патенту 22) 3 аявлено 19,12.72 (21) 1869026/28-1 1) М. Кл 2 А 61 К 35/78С 076 5/00 23) Приоритет (32)31) (33 Государственный комнт Совета Министров ССС по делам изобретенийи открытийпубликовано 15.01,76, Бюллетень2 ата опубликования описания 09.04.76 Авторыизобретен Иностранцыович, Кальман Сас, Дьердь фекете,р, Эстер Дежери и Янош Элеш(ВНР)странное предприятиеДЕОН ВЕДЬЕСЕТИ ДЬЯР РТ(ВНР) Каролина Йован Эмил Битти(71) Заявит Ин РИХТЕР ГЕ(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВИНКРИСТ Изобретение относится к области медицины.Известен способ выделения винкристина из алкалоидсульфат ной смеси, полученной из %пса гоэеа 1. путем растворения в смеси хлористого метилена - хлороформа (2: 1), хроматографирования, элюирования тем же растворителем, управления, Однако известный способ дает низкий выход винкристина.С целью повышения выхода винкристина по предлагаемому способу алкалоидсульфатную смесь предварительно обрабатывают смесью муравьиной кислоты и уксусного ангидрида с последующим подщелачиванием до рН 8,5 - 9,0,П р и м е р 1, 3,85 г сырой алкалоидсульфатной смеси, которая получена известным способом, растворяют в смеси из 35 мл 98%-ной муравьиной кислоты и 5,75 мл уксусного ангидрида и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем раствор выливают в 160 мл воды с температурой 0 - 5 С, в нем при охлаждении с помощью также охлажденного, концентрированного водного аммиака устанавливают значение рН - 8,5 - 9,0, и раствор обраоатывают 300 мл метиленхлорида в несколько ступеней до негативной реакции на алкалоиды. Объединенную и обезвоженную метиленхлоридную фазу упаривают до сухого остатка при пониженном давлении. Получают 3,1 г песочного цвета аморфной смеси димерных алкалопдных ос нований, в которой первоначально имеющийсяХ-десметилвинбластин в результате формилирования уже,превратился в винкристин. Смесь растворяют в этаноле и путем добавления 1%-ного этанольного раствора серной кисло ты выделяют сульфатную смесь димерных алкалоидов.Кристаллическую сульфатную смесь дпмерных алкалоидов растворяют в 20 мл смеси хлороформ - метиленхлорид в соотношении 15 1: 2, и раствор хроматографируют на колонне,содержащей 250 г частично дезактивированной водой окиси алюминия, благодаря чему связываются сульфатные группы и выделяются свободные алкалоидные основания. Элюпру ют смесью растворителей приведенного состава, димерные алкалоиды извлекают из колонны в форме свободных оснований, Фракции отбирают каждая по 50 мл. Первая - третья фракции содержат сопутствую щие алкалоиды, четвертая - девятая фракции - вибластин и возможно имеющийся винлеурозин. Винкристин появляется в девятой499778 Составитель А, Покатилов Техред Т, Курнлко Корректор Е, Хмелева Редактор В. Филиппова Заказ 616/15 Изд.1076 Тираж 629 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 фракции, его элюация заканчивается с 18-й фракцией. Идентифицированные с помощью бумажной или соответствующей тонкослойной хроматографии винбластин, винлеурозин и винкристин, содержащие фракции, раздельно упаривают до сухого остатка, Содержащие аморфные димерные алкалоидные основания вещества превр ащают указанным путем в сульфат. Из четвертой - девятой фракций получают 2,0 г винбластинсульфата, из 9 - 18 фракций - 0,25 г сырого винкристинсульфата, который перекристаллизовывают из смеси метанола и этанола в соотношении 1: 4, 1 ац =+11 - 12 (С=1, вода).Лу=0,30 (появляется с живым синим цветом),Соединение идентифицируют с помощью инфракрасной спектроскопии, При 5,94 р появляется, сравнивая с ИК-спектром винбластина, сильно выраженная полоса абсорбции,Хроматографические исследования в тонком слое проводились с адсорбентом окиси алюминия 6. Мегс 1(. В качестве жидкости - носителя служил хлороформ, который содержал 0,5% метанола, проявлялся с концентрированной фосфорной кислотой, содержащей 1 Ъ церийаммонийсульфата. П р и и е р 2. Из 3,1 г полученной, как в примере 1, песочного цвета смеси аморфных димерных алкалоидных оснований выделяют винбластин и винкристин с помощью хроматографии. Смесь алкалоидных оснований растворяют в 15 мл бензола, и раствор хроматографируют на колонне, которая содержит 150 г смоченного бензолом алюминийоксида активности Ш. Сначала элюируют с 400 мл бензола, причем отбирают 50 мл фракции, С помощью оензола извлекается большая часть 4сопутствующих алкалоидов. Затем далее элю.ируют с 450 мл смеси бензол-хлороформ в соотношении 2: 1, причем извлекаются оставшиеся мономерные алкалоиды и имеющийся 5 только в небольшом количестве винлеурозин,Путем последующего элюирования с 450 мл смеси бензол-хлороформ в соотношении 2:1 получают винбластин, Элюируют с 1500 мл смеси бензол-хлороформ в соотношении 1:1, 10 причем извлекается связанный с адсорбентомвинкристин. Разделенные на основании бум ажной или соответствующей тонкослойной хроматографии элюаты упаривают до сухого остатка. Получаются 2,6 г аморфного ос нования винбластина, из которото описаннымв примере 1 путем получают сульфат. Получают 2,2 г кристаллического винбластинсульфата.При выпаривании элюата, содержащего 20 винкристин, получают 0,32 т аморфного основания винкр истина, из которого получают сульфат.Выход 0,27 сырого винкристинсульфата.Выход после перекристаллизации из смеси 25 метанолэтанол в соотношении 1:4 составил0,21 г винкристинсульфата. Формула изобретенияСпособ выделения винкристина из алкало идсульфатной смеси, полученной из Ипеагозеа 1. путем растворения в смеси хлористого метилена-хлороформа (2: 1), хроматографирования, элюирования тем же растворителем, упаривания, отличающийся тем, что, 35 с целью повышения выхода винкристина, алкалоидсульфатную смесь предварительно обрабатывают смесью муравьиной кислоты и уксусного ангидрида с последующим подщелачиванием до рН 8,5 - 9,0,