Способ получения цитохрома с

- ",О П=И-:6 А Н И Е ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(61) Зависимое от ав(23) Приоритет -Опубликовано 25 10 еударственнми иомитетавета Миииетроа СССРпо делам иэооретенийи отирмтий 75 Бюллетень39описания. 16.01. 76(72) Авторы изобретения нгелид Грузинской ССРА екологии исский государственный медицинский институ но-исследовательский, институт акушерства и аявителн ЛУЧЕНИЯ ЦИТОХРО(54) СПОС я к медици зобретение относитзвестен способ поо которому дрожжев лучения цитохромаые клетки дваждЫ центрифугированиэтилацетатом, тракцию водой в моння (10%-ного вора 70-7,5,уста,шн,те ;10 промывают и отделяют ем. Затем их разрушают после чего провод"т экс присутствии сульфата ам насышения) при рН раст йавливаемом аммиаком. После этого отделяют взвешенные час,тицы центрифугированием. Полученный фугат диализуют, затем диализ пропускают через колонку ДЭАЭ- целлюлозы.Полученную жидкость диализуют, подвергают повторной хроматографии не колон ке КМ-целлюлозы, при этом цитохром С адсорбируется в верхнюю часть колонки, Лесорбцию цитохрома С из колонки КМ- целлюлозы осуществляют аммиаком. Элюат диализуют и высушивают при температуоре -75 С. Выход сырого фермента цито- хрома С при пересчете на высушенные дрожжи составляет 0,03%.Цель . изобретения - сокращение процесса и увеличение выхода продукта./.1 ля этого экстракцию цитохрома Спосле разрушения дрожжевых клеток осушествляют раствором сахароэы, а очистку продукта проводят последовательнойб,сорбцибй его в статических условиях на, КЯ-целлюлозе и пропусканием элюатачерез колонку ДЗАЗ- целлюлозы и КМ целлюлозы,Предлагаемый способ заключается в19 следующем,Клетки пекарских дрожжей разрушаюпэтиламетатом я центрифугяруют при5000 об/мин в течение 10 мин. Разруенные клетки промывают дистиллированФ1 ой водой два раза и повторно центрифу.Фгируют.Из разрушенных и промытых клетокэкстрагируют цитохром С раствором сахарозы (0,25 М). Причем осуществляют20 этот процесс в присутствии сульфата аммония до 10%-ного насыщения. ЗначениерН раствора с помошью 5% ного растворра аммиака устанавливают 7,0-7,5. Зам раствор оставляют в покое при 5 о25 С в течение 2,5-3,0 часов. После,",ляа,; ,""ЯРент, Г,: жпороп уп,Ягаряиа 1 01 этого его центрифугируют прн 13000 об/мин В теченяе 10 мин пря 1-4 С,Полученную нядосядочеую жидко ть красноватого цвета проверяют спектрофотометрическя. Пря наличии максимумов спектропоглошения пря длинах волн 316,412,548 и 548 нм лродолжают процесс.Жидкость ставят на дяяляз в целлофячовых мешках против 20 Объ 8 МОВ 2 мЛ раствора Одноэсмешенного фосфятя калия содержаНего О .5 М сяхярозы В СечениеО чяс, а затем псопускяют чер 8 з КОПОБ- ку КМ-целлюлозы, Обработанной 2 мМ раствором фосфятз калия в статических условиях (е в пезердуарах 1 л Дсорбяоо ванный цятохоом , нЯ КМ- целлюлозе пе реносят на стеклянную Воронку и промывают 10 мМ раствором Однозамешенно, о осфата ЧЯРтЯ (ф ПОЯМЕттЕЧЯюМ ВЯК гУ 1 Я )Элюцио проводят буферным раствором двузям.шенпопо росфатя чятвяя р 1 Я , О. ф ЛЮЯТ ПРОПЪСК ЯЮТ ЧЕРВЗ КОЛОЧКЪ"Й 4цечлюло"-ь Ооработанной Указанным вьпне буфером,Раствор диялязуют В целлофановых ме-. шках пгыуряв 20 объемов, . мЯ ча, твора ОДНОЗЯМ 8 ШЕННОь 0 носфа"Я КЯЛН 6, В ПРЯСУТ- ствяя О,25сахароы в течение 8 затем хромятогря 4 яруют ня холопке .:= целлюлозы., промывяю 1 я элюнрукл.Раствор цятохрома С ставят на дяализ против дистиллированной воды в течение 10 няс, после чего Высушивают ляофнлы сопя СБ ыход фермента при пересчете на высушенные дрожжи - 0,04% при содержац няи чистого цятохрома С 50-55%,Цитохром С, полученный по данномуспособу, проверен в экспериментальных иклинических условиях и дал положительные результаты при лечении патологических состояний, связанных с гяпоксией ианоксией (различные нарушения кровобращения кислородное голодание; оргянизмяотравления мышечные и нервныезаболевания, травмы мозга, ожоги). 11 р 8 д м е т и 3 О б р 8 т е н и я Способ получения цитохрома С путем уО экстрякцяя разрушенных этяладетаТомдрожжевых клеток В присутствии сульфатааммония, освобождения экстракта от взвешенных частиц, диализа, последующейочистки с использованием ДЭАЗ-целлюлоч 6 зь и КМ-целлюлозы, о т л и ч Я ю щ ий с я тем, что, с целью повышения выхода п левого продукта, экстракцию осуществляют раствором сахарозы, я очисткупроводят последовательной сорбцией целс яО вого продукта В статических условиях няЕУТДю 1-целлюлозе и пропусканием элюатячерез колонку ДЭР,З-целлюлозы и КМЦЕДЛЮЛОЗЫ,