Способ получения вакцины против краснухи

.с: ОП И САМИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1 ц 457229 Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕНТУ 1) Зависимый от патента 51) М. К 21 с 7,0(22) Заявлено 29,07.67 (21) 1176000/31(32) Приоритет -Опубликовано 15,01,75. Бюллетень МеДата опубликования описания 13.03.75 Государственный комнте Совета РЛиннстров СССР по делам изобретенийи открьпнй 53) УДК 615.371(088,8)(72) Авторы изобретен Иностранцыьюнак и Морис Рольф Хиллем(США) вгении Берн Заявитель Иностранная фирма Мерк энд Компани, Инк,(США)4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КРАСНУХИ епени кантаминации ваквирусами предлагается ть в культуре клеток эм водить не менее 10 пассаИзобретение ов частности к спотив краснухи.Известен способ получения вакцин против краснухи путем культивирования вируса крас нухи в культуре клеток почек мартышки при 30 - 38 С, Однако культура ткани мартышки является неудовлетворительной средой для аттенуации, поскольку вакцина для людей, полученная из нее, обычно содержит множе ство различных неприемлемых чужеродных веществ.Для снижения стцины чужероднымивирус культивирова 5 брионов утки и прожей.При осуществлении способа вирус краснухи переносят с клинического материала, т. е. гортового мазка лиц, зараженных краснухой, в 2 культуру ткани эмбриона утки. Вирус краснухи помещают в стеклянные бутылочки, содержащие культуру ткани эмбриона утки, приготовленную из измельченных и трипсинированных зародышей утки приблизительно десяти дневного возраста. Питательной средой культуры может быть любая среда, способствующая росту клеток, например известная среда 199, к которой добавляют сыворотку крови теленка. После этого зараженные культуры клетки выращивают в термостате последовательным пересевом при температуре в пределах 30 - 38 С, желательно при 30 - 34 С (оптимальная 32 С), и 35 - 38 С (оптимальная 36 С). При этом вирус реплицируется в большом количестве и ослабляется.П р и м е р. Девяти-одиннадцатидневные эмбрионы утки после удаления головы и конечностей тонко измельчают в стерильных условиях, а измельченную ткань промывают несколько раз раствором Хенка, трипсинируют при 36 С с использованием 0,25% трипсина (1 Э 11 со 1: 250) в тройном соленом буфере в течение 2 - 3 ч. Клеточную суспензию собирают стерильной марлей и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин, Уплотненные клетки вновь взвешивают в ростовой среде (среда 199) для подсчета, содержащей 2% сыворотки крови теленка, нагреваемой при 56 С в течение 30 мин, и 50 мг/мл неомицина. Культуру высевают в бутылки при концентрации 350 000 жизнеспособных клеток на 1 мл, инкубируют от 36 до 48 ч при 36 С и используют для повторного размножения или для приготовления вакцины.Культуры ткани эмбриона утки готовят в стеклянных бутылках с использованием питательной среды 199, содержащей 2% неактивиРедактор Л. Тюрина Заказ 391/17 Изд.1022 Тираж 529 ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Типография, пр. Сапунова, 2 рованной сыворотки крови теленка в качестве ростовой среды. Через 3 - 4 дня после посева ростовую среду удаляют, а бутылочные культуры 4 раза промывают раствором Хенка - 100 мл на одну промывку и инокулируют 2,5 млн. вируса краснухи на бутылку. В каждую бутылку добавляют 60 мл среды 199, содержащей 10% соответствующего вещества, стабилизирующего вирусную внфекционность, и затем культуры инкубируют при 30 - 34 С. В ростовую и поддерживающую среду вводят неомицин при концентрации 50 мг/мл, Вирус- содержащую массу снимают через 2 - 4 дня и культуры в бутылках пополняют свежей поддерживающей средой, содержащей стабилизирующее вещество. Десять повторных пассажей выполняют при 32 С.Титрование на инфекционность проводят в культурах почечной ткани мартышки. Вирус- содержащие жидкости хранят при 70 С, Берут пробу для контроля и испытания на безопасность, Оставшуюся после пробы жидкость очищают и проверяют на безапасность на обезьянах. В оставшуюся жидкость добавляют со ответствующее дополнительное стабилизирующее вещество, помещают в отдельные бутылочки и высушивают, после высушивания закупоривают, запечатывают и хранят. 10 Предмет изобретения Способ получения вакцины против краснухипутем культивирования вируса краснухи в культуре клеток при 30 - 38 С с последующим 15 отделением вируссодержащего материала известными приемами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью снижения степени кантаминации вакцины чужеродными вирусами, вирус культивируют в культуре клеток эмбрионов утки 20 и проводят не менее 10 пассажей.