Способ изготовления терапевтического энзима

Класс ЗОп, 8 ПАТЕНТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕ ОПИСАНИЕ способа изготовленля терапевтического энзима.К патенту нн-ца Эрнста Теодора Кребс (Е. Т, КгеЬа), в г. Сан-франциско, СШЛ, заявленному 30 апреля 1933 года(спр. о перв.128036). О выдаче патента опубликовано 30 апреля 193 года. действие патента распространяется на 15 лет от 30 апреля 193 года,(12 Ц Предметом изобретения является вновьоткрытый автором способ приготовления-активного терапевтического энзима, обладающего избирательным свойством разрушать протеины злокачественных опу.холей (например раковых), а именноразлагать молекулярные группы протеина, заставлять злокачественную опухоль растворяться и размягчаться и вызывать более или менее полное рассасывание опухоли. При этом энзим не вызывает каких-либо вредных эффектов,например, образования новых злокачественных клеток, и т. п.Согласно изобретению тааим продуктом, обладающим указанным избирательным действием на протеин и клеткизлокачественных ойухолей, являетсякомплекс энзимов, называемый эмульсином, в частности же тот комплексэнзимов, который получается из косточек плода ргцпцз а пещаса.Раствор энзима впрыскивают в любуючастьтела больного, страдающего злокачественной опухолью; лучше всеговводить энзим непосредственно в кровеносную систему (интравенозно),Специфическое действие энзима зависит, главным образом, от того, в какой степени стереохимнческое строение энзима соответствует строению вступающего с иим в реакцию соединения, т, е в данном случае, строению злокаЧествен-. ного протеина. Чем ближе структурный стереохимический изоиеризм между энзимом и замещающим его субстратом (злокачественным протеином), тем сильнее должно быть его специфическое действие,В настоящее время наиболее специфическое действие на злокачественный протеин оказывает комплекс энзимов, получаемых из косточек плода ргцпца аггпен 1 аса.Эмульсии, получаемый из косточек плода ргцпцз,;аппешаса, представляет собою комплекс энзимов, содержащий по меньшей мере шесть энзимов, и от.личается от исследованных заявителем эмульсинов, извлеченных из других источников. Рассматриваемый эмульсин содержит следующие энзимы: амигдалазу, пруназу, оксинитридазу, каталазу, пероксидазу и один из протеолитйческих энзимов. Можно также йредпола-, гать присутствие изомальтозы и оФой, а может быть я нескольких липаз.Предлагаемый энзим может быть извлечен обыкновенным методом, применяющимся при экстракции эмульсинов, однако, лучше извлекать его следующим, способом. Мелко размолотый материал обрабатывают эфиром для удаления масел и жиров. Остаток высушивают на воздухе, превращают в порошок, извлекают из последнего 80 оо этиловым спиртом растворимйе полисахариды, дисахариды и другие естественные составные части, промывают эфиром и вновь высушивают на воздухе. Растерев материал в ступке, производят экстракцию слабым раствором щелочи (1: 5000 до 1: 10000) при низкой температуре и быстро филь.труют в сосуд, охлаждаемый льдом. После этого быстро осаждают при помощи этилового алкоголя, взятого в объеме, равном половине объема фильтрата, и, уда.лив находящуюся над осадком жнд.кость, прибавляют к осадку равное количество этилового спирта и центрофугируют. Промыв осадок эфиром на белой фильтровальной бумаге, рассыпают его на листе белой пропускной бумаги, высушивают при 50, растирают в мелкий порошок в стерильной ступке Веджвуда и упаковывают в плотно закупоренные бутылки из специального материала (ааЬег ЬоШез).К применяемому раствору щелочи (гидрату окиси калия или натрия) можно прибавлять в качестве буфера кислый фосфорнокнслый калий или фосфорно- кислый натрий.В виде примера приводится нижеследующий прием выполнения предлагаемого способа, дающий очищенный комплекс энзимов, отличающийся высокими канцеролитическими свойствами, иэ которого удалены камеди, альбумины и, может быть, вредные посторонниеэпзимы,Растворяют 40 ю сырого комплекса энзиМов в 400 см 1: 5000 раствора гидрата окиси натрия или калия, тщательно растирая в ступке Веджвуда до тех пор, пока вся масса не растворится. Тщательно перемешивают этот раствор вместе со 160 сма хлороформа, после чего при-бавляют 560 см 95 у -го этилозого спирта, снова тщательно йеремешивают, прибавляют 300 см эфира и опять тщательно перемешивают, после чего дают отстояться, причем хлороформ оседает на дно вместе с очищенным энзимом. Находящуюся сверху жидкость полностью сцеживают, а состоящий из хлороформа и энзима осадок переносят в выпаривательную чашку, где хлороформ отгоняют при помощи сжатого воздуха. Остаток обрабатывают десятикратным объемом этилового спирта и полученную массу раскладывают на белой стерильной фильтровальной бумаге. Когда спирт отфильтруется, остаток промывают алкоголем, фильтровальную бумагу кладут на белую пропускную бумагу и высушивают при 50. Хорошо просушенную массу превращают в порошок в стерильной ступке Веджвуда и хранят в хорошо закупоренных бутылках из специального материала (атЬег Ьой 1 ез) до момента использования.Стандартный раствор приготовляют путем растворения энзима в пропорции одна сотая (0,01) грамма энзима на один куб, см. стерильной дважды перегнанной воды.Энзим можно применять также в вгде альбумозы, соединяя его с кровяной сывороткой нли другими альбуминами, однако, повидимому, следует предпочесгь чистый, приготовленный по описанному выше способу экстракции при помощи хлороформа энзим,Предмет патента.1, Способ изготовления терапевтического энзима, отличающийся тем, что сырой комплексный энзим, полученный из косточек плода ргпппз агтеп 1 аса, растворяют в растворе гидрата окиси натрия или калия, обрабатывают хлороформом, этиловым спиртом и эфиром, после выделения энзима из хлороформ- ного слоя выпаривают продуванием воздуха и остатки влаги удаляют этиловым алкоголем и действием температуры, не превышающей 50.2. Прием выполнения способа по п, 1, отличающийся применением для раствора энзима в растворе гидрата окиси калия или натрия в качестве буфера кислого фосфорнокислого калия и фосфорнокислого натрия.