Способ получения бензилпенициллинацилазы

(22 дено 14,07.72 рисоединением заявкисударственныи комитетоввта Министров СССРоо делам изобретени открытий 32) ПриоритетОпубликовано 25,03 615.779.94. Клейнер, С, В, Лопатнев, Е. С. Былинкина и Г. И. Альбрехт Рижский завод медицинских препарат 1) Заявитель(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕН тся интенсификаП р едл оженный ферментацию при ольшей ацилазной имальную продолтем самым болеетехнологическое ъем продукта. Целью изобретения явля ция процесса ферментаци способ позволяет прекратит достижении культурой наиб активности, обеспечить опт жительность ферментации и рационально использовать оборудование и повысить с ермен- относити дывслед вн ости Длятацию тельно ханияза сни дыхан Изобретение относится к области медицины и касается способов получения бензилпенициллинацилазы.Известен способ получения бензилпенициллинацилазы путем глубинного культивирования Е, со 11 в среде содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта.Ферментацию в данном случае прекращают при достижении определенного уровня биомассы, что не всегда совпадает с достижением культурой максимальной ацилазной активности и не всегда обеспечивает оптималвную продолжительность ферментации. достижения поставленнои цели фпрекращают при достижении,постоянного уровня интенсивнокультуры, который наблюдаетсяжением максимальной интенся. ЕНЗИЛ ПЕН И ЦИЛЛ И НАЦИЛАЗЬ В таблице приведено время достижениямаксимальной активности культуральной жидкости при определении разными методами.Из таблицы видно, что вне зависимости от 5 фактичеокого времени достижения максимальной активности концентрация СОе и Ое в отходящем газе наиболее четко показывает момент окончания накопления ацилазной активности в культуре.10 Пример 1. В ферментер загружают 100 лпитательной среды, содержащей 2% кукурузного экстракта (в пересчете на сухое вещество) и 0,1% фенилуксусной кислоты, доводят рН раствором МаОН до 6,9 и стерилизуют в 15 ферментере в течение 40 мин при 124 С.После посева часть выходящего из ферментера газа направляют в оптико-акустический газоанализатор типа ОА 2209. По мере роста микроорганизма прибор фиксирует уве личение концентрации двуокиси углерода ввыходящем из ферментера газе, Концентрация двуокиси углерода в выходящем из ферментера газе резко падает (с 1,96 до 1,23%) между 10 и 10,5 час роста и .продолжает дер жаться на том же уровне до 11,5 час роста.На 11,5 час роста культивирование прекращают, и культуральную жидкость передают на дальнейшую обработку.В момент слива рН культуральной жидко сти 8 1, концентрация биомассы 4 2 г/л и420660 Способ определения максимальной ферментной активности культуральной жидкостиВремя окончания ферментации, час 13 ПрямойКосвенные; 161911,5 161711,5 1516,513 но изменению оптической плотности но времени достижения рН 8,2 по изменению концентрации СОя в выходящем из ферментера газе но изменению концентрации Оя в выходящем из ферментера газе 11 14 10 10 13 11,5 11,5 Предмет изобретения Составитель С. ЩеневаТехред Е. Борисова Корректор А. Васильева Редактор Д. Пинчук Заказ 2308/1 Изд.713 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 бензилпенициллинацилазная активность культуральной жидкости 14,5 ф. ед,Пример 2. 100 л среды готовят, засевают и культивируют как в примере 1,После посева часть выходящего из ферментера газа направляют в парамагнитный газо- анализатор типа МГК.По мере роста микроорганизма прибор фиксирует уменьшение концентрации кислорода в выходящем из ферментера газе,Между 12 и 12,5 час роста концентрация О в выходящем из ферментера газе резко повышается (с 18,8 до 19,8%) и продолжает держатся примерно на том же уровне до 13,5 час роста.На 13,5 час роста культивирование прекращают, и культуральную жидкость передают на дальнейшую обработку. В момент слива рН культуральной жидкости 8,0, концентрация биомассы 3,9 г/л и бензилпенициллинацилазная активность культу- ральной жидкости 14,8 ф. ед,5 Способ получения бензилпенициллинацилазы путем глубинного культивирования Е. со 11 10 в среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йся тем, что, с целью интенсификации процесса, ферментацию прекращают при достиже нии относительно постоянного уровня интенсивности дыхания культуры, который наблюдается вслед за снижением максимальной интенсивности дыхания.