Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров

и) 42 О 636 Союз СоветскихСоциалистицескихРестгу бди к(51) М. Кл. С 081 27 Государстееннай комитет Соаета Министров СССР ао делам изо 5 ретений и открытий(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПОЛИМЕРОВ Изобретение относится к получению волорастворимых полимеров с физиологически активными свойствами.Известен способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров взаимодействием сополимеров И-винилпирролилона с малеиповым ангидридом или кротоновой кислотой, и физиологически активных соединений, например стироидов, в органическом растворителе.С целью регулирования свойств физиологически активных полимеров предлагается в качестве физиологически активных соединений использовать белково-пептидные гормоны - адренокортикотропный и соматропный (АКТГ и СТГ), которые ковалентно присоединяются к полимерам,Полученные полимерные гормоны ооладают рядом интересных свойств, например пролонгированным действием или сохранением иммунологических свойств при отсутствии гормональной активности,Использование синтетического полимера для реакции с гормопом позволяет широко варьировать величину молекулярного веса, количество присоединенного АКТГ или СТГ и менять природу полимера (гидрофильный или гидрофобный и пр.), что будет влиять на скорость всасывания гормона. Присоединение АКТГ к сополимеру И-випилппрролплоп-малепповый ан: илрил проволтся взапмолейевием реагентов в органическом растворителе. АК 1 Г присоединяется к 5 полимеру за амипогруппу серпна, образующееся полимерное пропззолное гормона уже не облалает б ологп еской активностью.Прп этом, .еняя соотношение взятых в реакцио компопеТов, окно изоирателыо осу ществить изаимоЛествие с опреЛеленнымигруппами гормона и получать полимерные произволпь.е гормонов, не оолалающие гор.она,ыо активОстьо, но сохраяоцие атигенные свойства пативпого гормона или био логически ктивные произвсЛные с пролонгированным временем Лействия.Полученные полимерные произво.ные АКТГи СТГ растворпмы в воле, Содержание белка и пих опрелеляют спектрофотометрически, по 20 поглощению прп 218 ммкм с учетом поглощения сополимера. Локализацию ковалентных связей в гормопах определяют по методу Грея и Хартеп путем проведения реакции данзплирования с 1-ликетламинонафталин- 25 сульфанилхлорилом (Д 11. ) и послелующейдвумерной тонкослойпсй хроматографией на бумаге.П ример 1. К раствору 1 г сополпмера 1 Чвпнилппрро,илона (ВП) и кротоновой кисло ты (КК) (ВП-КК,7 - 4,3 мол % т 1=0,20)420636 Предмет изобретения Составитель О. Рокачевская Редактор Н. Джарагетти Техред Е. Борисова Корректор М, ЛейзерманЗаказ 1984/4 Изд. Ма 698 Тираж 565 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 в 30 мл с кого диметилформамида (ДМФ) дооавляют .,2 мл сухого триэтиламина и 0,05 мл из обутилового эфира хлоруголь ной к 11 слоть Р 1 перевешиваОт в течение Одного часа прп охлаждении льдом. К полученному полимерному смешанному ангидриду при охлаждении добавляют раствор 1 г бычьего АКТГ и 90 мл сухого ДМФ, Реакционную смесь перемешивают в течение 3 час при охлаждении и оставляют на ночь в холодильнике. Зачех отфильтровывают осадок, а филь- трат ос 11 гкда 1 от диэтиловым эфиром, Продукт очищают гсреосаждением из этилового спирта в эфир.Выделен 1 г продукта, выход 50",о.АКТ присоединен к сополимеру за в-аминогруппы лизина и гидроксильную группу тирозина. Биологическая активность по сравнению с нативным АКТГ составляет 70 о 11 о.П р имер 2. По вышеописанной методике из 1 г бычьего АКТГ и 9 г сополимера ВП-КК (состав тот же) получают 8,4 г продукта, Выход 84%. АКТГ присоединен к сополимеру за концевую аминогруппу серина, е-аминогруппы лизина и гидрокспльную группу тирозина, Производное на 90/о теряет биологическую активность по сравнению с нативпым АКТГ, но аптигенные свойства сохраняет такие же, как в исходном белке,П р и м е р 3, К раствору 1 г сополимера М- винилпирролидона (ВП) и малеинового ангидрида (МА) (ВП-МА- 22 мол. %; (т = =0,28) в 50 мл сухого ДМФ добавляют раствор 1 г бычьего АКТГ в 90 мл сухого ДМФ. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 час при комнатной температуре и оставляют па ночь в холодильнике. Продукт выделяют путем осаждения диэтиловым эфиром. Осадок растворяют в 3,4 мл 5%-ного охлажденного раствора бикарбоната натрия и высушивают лиофильно. Выделен 1 г продукта, выход 50%, АКТГ присоединен к сополимеру за концевую группу серина. Производное не обладает биологической активностью.5 П р и м е р 4. К раствору 0,5 сополимера Хвинилпирролидопа и кротоновой кислоты (ВП-КК,7 - 4,3 мол.%, т) =0,20) в 4,5 мл сухого диметилсульфоксида добавляют 0,6 мл чрнэтиламина и 0,025 мл этилового эфира 10 хлоругольной кислоты, Полученный растворперемешивают в течение 50 мин при комнатной температуре и добавляют 50 мг СТГ человека, растворенного в 0,2 мл 0,1 н. КаОН и зачем в 5 мл ДМСО. Реакционную смесь 15 перемешивают в течение 6 час и оставляютпа ночь при комнатной температуре, Затем высаждают в эфир-ацетоновую смесь (1: 1) и переосаждают из этилового спирта в диэтиловый эфир. Выделено 0,4 г продукта, выход 20 72 о/СТГ присоединен к сополимеру за конечнуюаминогруппу фенилаланина, Продукт сохраняет биологическую активность и пролонгирует действие гормона. Максимум действия от мечается через 3 - 4 час по сравнению с действием нативного СТГ через 30 мин. 30 Способ получения водорастворимых физиологически активных полимеров путем взаимодействия сополимеров М-винилпирролидона с малеиновым ангидридом или кротоновой кислотой и физиологически активного соединения 35 в органическом растворителе, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью регулирования свойств получаемых полимеров, в качестве физиологически активного соединения используют адренокортикотропный или сом атропный 40 гор мои.