416969

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 416969 Союз СоветскихСоциал истин ескихРеспублин К ПАТЕНТУ Зависимый от патента-М. Кл, б 01 п 31.22 С 07 с 93/14Заявлено 24.11.1971 ( 162453623-4) Приоритет 06.111.1970,2976,70, Швеция Гасударственный камитет Саввта й 1 инистрав СССР па делам изабретений и открытийУДК 547,625(088.8) Опубликовано 25.02.74. Бюллетень7 Дата опубликования описания 13.08.74 Авторыизобретения Иностранцы Нилс Аке Йонссон, ференс Мерени и Ларс-Эрик Вестлунд(Швеция) Иностранная фирма АБ КабиЗаявитель ХРОМОГЕН ДЛЯ АНАЛИЗА 30 Изобретение относится к методу анализа соединений, например сахаров, и может найти применение для аналитических целей. Известен метод анализа аналогичных соединений, способных образовывать в процессе реакции с оксидазой, специфичной для исследуемого сахара, перекись водорода. Последняя используется для превращения хромогена, например О-дианизидина или О-толидина, который в восстановленной форме не способен поглощать в видимой части спектра, в окисленную форму, поглощающую видимый свет. Под влиянием энзима пероксидазы хромоген окисляется пропорционально количеству выделившейся перекиси водорода, что влечет за собой пропорциональное изменение цвета. Использование для этой цели О-дианизидина или О-толидина связано с некоторыми трудностями. Так для них характерна низкая растворимость, для восстановленной формы, около 100 мг/л, а для окисленной около 10 мг/л, Вследствие этого цвет должен фиксироваться в течение короткого отрезка времени. Время, гребуемое для развития окраски в определяемой области, чрезмерно длительное (50 - 60 мин). Кроме того, окраска окисленного О- дианизидина чувствительна к свету и быстро уменьшается вплоть до 25 оо, что дает неточные результаты,Предлагаемое в качестве хромогена соединение общей формулы 5 1 Н., Х - А- (0)л (О- А-Х где и=0 ичи 110 А - алкильная цепь, имеющая, по крайней мере, 3 атома углерода;Х - сульфо- или карбоновая кислота,или его соль с кислотами или основаниями, например соответственно ди-НС 1 или ди-,Иа, 15 для анализа соединений, например сахаров,которые под действием специфической оксиредуктазы образуют перекись водорода, удовлетворяет повышенным требованиям современной аналитической практики.20 В качестве вещества для сравнения в аналитических определениях применяли глюкозу вместе с ее специфической оксидазой - глюкозоксидазой, включаемой вместе со стандартными составными частями реагента в следую щую стандартного смесь:Хромоген, ммоль 0,2 Пероксидаза, ед 300 Специфическая оксидаза, ед 3000Фосфатный буфер416969 Время развития окраски (мин) ири температуре С Растворимость при рН 7, мг,л Понижение экстинкции после облучения в течение 5 мин вольфрамовой лампой37 25 о-Дианизидин о-Толидии О-Толидин Из примера 1 Из примера 2 450 50 110 26 6,5 10 430 45 60 130 630 4,5 10 Нестойкое 130 450 700 6,5 70000 25 15 450 6,5 12000 15 120 25 где п=0 или 1; Изд.575 Тираж 651 Типография, пр. Сапунова, 2 Подписное Заказ 1801/5 Испытуемые растворы содержали глюкозу в концентрациях 25, 50, 100, 200, 300 и 400 мг на 100 мл.После приготовления реагентов в соответствии с изложенным проводили определения биологических, содержащих белок материалов, например крови. В этих случаях первоначально осаждали белки, наприме 1 р, с помощью 0,33 М буферного раствора, содержащего глицин с хлорной кислотой (рН 2,7), после чего образец разбавляли в соотношении 1: 21. Перед окончательным определением этот раствор разбавляли указанным раствором реагепта в соотношении 1: 11. После этого развитие окраски измеряли в диапазоне волн 450 нм, Когда схему разбавления применяли к испытуемым растворам, получали растворы со следующим содвржанием глюкозы 2,2; 4,2; 6,8;13,0 и 17,3 мг(л. П р и м е р 1, Приготовление реагента в соответствии со стандартным составом, содержащего 0,2 ммоль у,у- (4,4-диамино,3-дифенилдиокси) димасляной кислоты-ди-НС 1.В качестве хромогена соединение апробируют станда 1 ртной методикой по отношению к различным испытуемым растворам. Максимальное развитие окраски в диапазоне волн 450 нм наступает в течение 25 мин при 25 С и соответственно в течение 15 мин при 37 С. Растворимость,в воде соли нового хромогена, полученной в результате присоединения кислоты, хорошая и поэтому осаждения его не Предмет из о бр етен ия Применение хромогена общей формулыпроисходит. Стойкость окраски хромогена при максимальной экстинкции позволяет вести отсчет произвольное время (в переделах 4 час).Этот период является наиболее продолжигель ным из изученных.В случае применения автоматических анализаторов желательно, чтобы резина или различные пластические материалы, составляющие часть трубчатой системы, не меняли бы 10 окраски при действии раствора реагента. Образцы различных труб помещают в такой раствор на 25 час. Эти образцыпогруженные в реагент, содержащий хромоген, остаются бесцветными, тогда как образцы труб, помещен ные в раствор, содержащий О-дианизидин становятся бурыми, В некоторых случаях происходят реакции между х 1 ромогеном и материалом трубы и последующие анализы дают неправильные данные,20 Пр имер 2. Приготовление реагента в соответствии со стандартным составом, содержащего 0,2 ммоль у,у- (4,4-диамино,3-дифенилдиокси) дипропансульфокислоты. Полу.ченные данные аналогичны результатам, при веденным в примере 1.Испытания остальных соединений показывают, что свойствами, типичными для двух хромогенов из примеров 1 и 2, обладают также и другие хромогены, отвечающие приведенной 30 общей формуле. Сравнение свойств обычноярименяющихся производных бензидина и предлагаемых хромогенов приведено в таблице. А - алкильная цепь, имеющая, по крайней мере, 3 атома углерода;Х - сульфо. или карбоновая кислота,или его соли с кислотами или основаниями, 40 например соответственно ди-НС 1 или ди-Ма,для анализа соединений, наприме 1 р сахаров, ,которые под действием специфической оксиредуктазы образуют перекись водорода.