Способ выделения экзотоксимного комплекса

Союз Советск Социалистических РеспубликЗависимое от авт, свидетельства 5)е Заявлено 22.Х.1971 ( 1716651,30-1,Кл. С 121 О присоединением заявки Государственный комит Совета Министров ССС по делам изобретений и открытийПриоритетОпубликовано ОЗ.Х.19 ДК 63:576.8(088.8 юллетспь Ъ 39н и я,).11. 1974 та опуолпкованпя оппс Авторызобретепи О. А. Алешина,-исследова ты растен ман, А, А, Чудин,ова, С, Б. Тихомирин, 3. П. ФедосоваА. Скорикова П, Синицина,а, А, И. %1)лысова,Н. К, Федоров Всесоюзный научно средств защельскии институт микробиологическихй и бактериальных препаратов аявитс ПОСОБ ВЫДЕЛ Е НИ Я ЭКЗОТО КСИ Н НОГО КОл 1 ПЛ Е ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС 11.1.1.18 1 ЯЯЕСТ 1.)8 С)ик) Г) с Н О ВВ ПСе Оз)61 доосадокрпровдП) ОСД.1. 1)д Т- пя коп- Пдвсстй коммпсрдпозво,)птн)1 тх- прпцли- ордцоткп 1Изобретение относится к сельскохозяйственнойпой микробиологии, в частности к способам производства эптомопатогенных препаратов, в особенности к способам выделения токсинов, 5Известны способы выделения токсинов. Из пих паиболсс близким к предлагаемому как по количеству совпадающих признаков, так и достигаемому эффекту, является способ выделения и очистки экзотоксинного комплекса, 10 описанный Вар)каком и Дсдондером. Это г способ включает предварительную фильтрацию культуральной )кидкости, последующую многоступенчатую обработку уксуспокислой ртутью, затем сероводородом для разрушения 15 уксусокислой ртути, соли которой удаляют цснтрифугпроваппсм па холоду (1 С), аэрацио пддосддочпой жидкости с доведением сс рИ до 6,0 и обработку активнровапным углсъ д:151 сорцции экзОтоксина. Посторонние 20 вещества удаляют предварительной элюцией 0,01 М этплсндпамшггетрауксусной кислогой. После этого эл)оируют тсрмостабпльпый экзотокспнный комплекс аммонийпым спиртом. Полученный элюат высушивают под ва куумом при 40 С.Однако такой способ не экономичен, поскольку прсдполагдст обработку многих сотеп и даже тысяч тонн жидкости для получения экзотоксипа, содержание которого в 30 ней соствлс) Вс го 0,2 - 0,3",о (по л хомувесу),ЦСЛЬЮ ИЗОцрсТПП 51 НВ,151 ТС 51способа, позволяющего сч)идитьвыделение экзотоксипцго кцмплсчтуральной жидкости.Эта цель достпгдтся тм, что послчсппЯ кУльтУРдльной )кидкос) и, сод 1д КТИВНЫС СПОРЫ И вриТПЛЛЬ 1 В рсЗвыращпваппя Вдс. )пес,1 С)пк В фсре Па жцдКОй Срсд, ПОСЛд)Пс )ддЛкультуральои жидко) и любым игцспособом, напримр сс пдрировдпим.досг 1 дочной )кпдкОст)1, В котОрой с и.Оляной кислоть) зн;11 н)с р 1- мст;11101пределах 3,33,6 путм дьбдвлспп 5гсксдмтдфосф;)тд )дтрпя Хд .ч)д)(1)консчной кониа)тр;)ции 1 Вь)дляютэкзотокспнд, 1 цтц 1)ый д)л 51 От спан. В 3;1 впсн мости от нсо)хц;1)мосдцк либо растворяют в меч)ьп)см ос)1)воритсля, папрнмр воды, для получс)1цснтр)тд, лицо влшпвдют любымПЫ)1 СПОСООО.1, ПО 1 ОЛЬКХ ЭК;)ОТОКС 1)ПН 1плскс тсрмостдцплсн и Выдерживает ттуру до 120 С.Применен)1 описанного спососсо)рдтпть затр;)т).1 нд Обордсп)дис 1нологпческпй прццссс Высушпвднпязптсльно в 200300 рдз: вместо О399521 Токсичность после ь х досадка зкзосхотоксина в 5 Увод. до иервон ча "ысо Источник5 поу сн 1 я Способ осааилеии изкзотоксина э изото к с, и 1 го ооъема 1 вв/оРедактор Д, Пинчук гхоррсктор О, Тюрина Заказ 182/8 И за, М 100 Тираж 4)7 Подписное ЦНИИПИ Государственного когаитеса Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 45Типография, пр. Сапунова, 2 1 т жидкости обраоатывают 34 кг осадка; отпадает нужда в больших количествах дорогостоящих реактивов; це требуется холодильная установка; длительность технологического процесса сокращается в пять - -шесть рдз,П р и м е р. Культуральную жидкость, содержащую экзотоксинный комплекс, получают путем выращивания Вас 111 пв гпвес 1 пз бпк в заводском фсрментере (полсзный объем 10 700 л) на обычной среде, содержащей 0,75, технической глюкозы и 2 сса кукурузного экстракта (по сухому весу), при 28 С в течение 27,5 час при аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в 1 мин. Фугат, содержащий эк зотоксинный комплекс, отделяют от спор и кристаллов па сепараторе. С помощью 10 сс,- ной соляной кислоты рН фугата доводят до 3,3 - 3,6, после чего к нему добавляют гексамстафосфат натрия до конечной кошгсптря ции 1 вс. Жидкость выдсркивагот при комнатной температуре в течение 1 час. Образовавшийся осадок азотоксинного комплекса отделяют па сепараторе, Собранный осадок высушивают в вакуум-сушильном шкафу прп 40 С 25 в течение 24 час. Выход экзотоксинд по сухому весу (влджность 4%) 0,5%. Токсичность культуральной жидкости и выделенного из нес экзотоксицного комплекса 30изучена в сравнительных опыта.: пд комнатной мухе. Результаты представлены в таблице,Кя видно из таблицы, токсичгюсть экзотоксиццого комплекса полностью сохрашгздсь 35при выделении его указанным способозг,: 1 Ккв -конЦентРаЦПЯ пспытУсмого РаствоРа, вызываюцая гиосль 50 ; личинок комнатной мухи,1. Способ выдслспи 51 экзогоксицпого комплекса из кульгуральнсЙ жидкости Вдс 11 пв 11 твес 1118 Сгпк, включаюгцпй удаление пз нес биомассы, спор и кристаллов, ог.гисасосссссйс гс ТСМ, 51 ТО, С 11 СЛЬЮ СннжСПИ 51 311 Т 1)ят ПД ВЫДЕ- с 1 снис э 1 зот 01 свиного ко.1 плскса, послсднсс осуществляют путем подкислсния оставшейся культуральпоп жидкости, предпочтительно соляной кислотой, до р 1-1 3,3 - 3,6 и последующего добдвлсгпгя гсксамстафосфата натрия.2, Способ по п. 1, откгссссгющсслсс 5 г тем, ггто гсксамстафосфят пдтрпя добавляют до копсчггой кош;сптрдцшг 1",5 (по сухому весу).