Способ определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов

351892 Союз Соеетсних Социалистических Республнн(и М присоединением заяв иоритетубликовано 21 ЛХ.19 Комитет оо аелам изобретений и открытий ори Совете Министров СССРплетень ,й 2 2,ия 2.11,197 ата опубликовани Авторыизобретения атян, Ж. К, Лория и Н, К, Манеш. К, Манешин, А. А Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковыхвеществ ОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СООТНОШЕНИЯ ЖИВЫХИ МЕРТВЫХ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов.Известен способ определения соотношения 5 живых и мертвых клеток микроорганизмов облучением светом, вызывающим флуоресценцию клеток.Предлагаемый способ является более простым и дает возможность непрерывного изме рения соотношения живых и мертвых клеток.С этой целью облучают непосредственно культуральную среду при 400 в 4 нм, а затем регистрирую г собственную флуоресценцию окисленной и восстановленной форм пор фиринов, содержащихся в исследуемых клетках микроорганизмов с последующим определением по интенсивности облучения количества живых и мертвых клеток.Предлагаемый способ заключается в сле дующем,Систему микроорганизмов в виде суспензии, например взятой из ферментера, или в прессованном виде, или в виде разведенных в воде при различной концентрации микроор ганизмов, а также микроорганизмов выращенных на плотных агаризованных средах помещают в кювету или между двумя покров- ными стеклами н облучают светом в области 400 - 420 нм и измеряют интенсивность флуоресценции микооорганизмов в области 630 и 580 нм. Затем определяют соотношение живых и мертвых клеток микроорганизмов по отношению интенсивностей флуоресценции в этих областях.П р и м е р. 4 мл суспензии дрожжец СапйЙа, выращенных на углеводородах с концентрацией 60 г/л, без дополнительной обработки помещают в квадратную кювету. Одну из стенок кюветы, расположенную под углом 45 к направлению возбуждающего излучения, облучают светом длиной волны 404,7 нм, Разложение флуоресце;щпи клеток дрожжей в спектр проводят с помощью монохроматора ЗМР, интенсивность флуоресценции дрожжевых клеток в области 630 нм и 580 нм регистрируют на потенциометре КСП. По отношению интенсивностей флуоресценции в области 630 нм и в области 580 нм определяют отношение количества живых и мертвых клеток, содержащихся в суспензии.Из таблицы видно, что расхождение между измерениями предлагаемого способа и конт ролем не превышают -+1,5 с/о.Контрольный метод Предлагаемый метод Отклонение и редлагаемогометода от контрольного,Я интенсивность флуоресценции, 630 нл (живые), отн, ед,интенсивность флуоресценции, 580 нл (л 1 ертвые), отн. ед,Концентрацияя; отношеотношеживые клетки,мертвые клетки,ние ние г/л ж/м ца гО 5,3 163 5,25 846 0,020,01 0,0950,01 7,3 7,33 123 887 5,65 5,5 20 153 0,630,01 0,630,01 9,0 9,0 60 10 =2 9010 0,610,01 0,090,01 6,7 6,8 150 876 4,83 4,9 83 7 173 400 Без разведения Прессо- ванные С разведением 0,520,0013,47 3,55 788 225 Составитель М, Ларина Текред Л. Евдонов Редактор Г. Ивченкова Корректоры: Л. Чуркина и Н, Прокуратова Заказ 7318 Изд. Уз 1334 Тираж 406 ПодписноеЦНИИПИ Козитстз по дела;1 изобретений и открытпй при Совете Мипнстров СССРМосква, Ж-З 5, Раушская паб., д. 4 я Типография, пр. Сапунова, 2 Способ обеспечивает контроль состояния микробиологической системы, содержащей от 1,0 г/л до прессоьанного состояния с точностью 2%, что в четыре раза превышает точность определения известным ранее способом.Кроме того, предлагаемый способ дает возможность вести контроль состояния микробиологической системы непрерывно и автоматизированно. Предмет изобретения Способ определения соотношения живых имертвых клеток микроорганизмов путем облучения светом, вызывающим флуоресценцию клеток, огличаюцийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения точности определения, облучению подвергают непосред ственно культуральную среду в области длинволн преимущественно равных 400 - 420 нл, а затем регистрируют собственную флуоресценцию окисленной и восстановленной форм порфиринов, содержащихся в исследуемых 10 клетках микроорганизмов, с последующим определением по интенсивности облучения количества живых и мертвых клеток.