Способ выделения escher1chia coli и bakterium citrobacter из молока и молочных продуктов

283676 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республиктч эсмтвв 1 Зависим а Ъо от авт. свидетел Кл 421 5/1 900 28-1 лено 09,Х.1969 ( 13 с присоединением заявкиПК 6 01 п 33/04 К 637.127.6 (088. Прио вано 06.Х.1970. Б бликования описа Номитет по делам изобретений и открытий пои Совете Министров СССРЛЕНИЯ ЕЯСНЕК 1 СН 1 А С 01.1 И ВАКТЕК 1 ЬМИЗ МОЛОКА И МОЛОЧНЪ 1 Х ПРОДУКТОВ ПОСОБ1 ТКОВА олочиых продуктов, коопортящнмися. Во-втособа, заключающаяся в ьшим количеством пита- мешает широкому исктическнх и научно-проториях. И, в-третьих, возможно дифференцпот Вас 1 ег 1 цгп с 11 гоЬас 1 ег бренного роста на МПБ,ваниями молока и м торые являются скор рых, трудоемкость спо многоэтапности с бол тельных сред (пять), пользованию его в пра изводственных лабора при этом способе не ровать Езс 1 тепсЬ 1 а со 11 в случае их одновреь Изобретение относится к области микробиологических исследований, а именно к способам выделений ЕзсЬепсЬ 1 а со 11 и Вас 1 епцгп сйгоЬас 1 ег из молока, молочных продуктов, смывов с доильной аппаратуры и молочной посуды.Известный способ для определения колитптра молока и молочных продуктов, применяемый в настоящее время, заключается в следующем. Посев исследуемых проб на среду Кесслера (выращивание 24 час), последующий пересев со среды Кесслера на среду Эндо - 24 час, затем высев подозрительных по цвету и форме колоний на мясо-пептонный бульон (МПБ) - 3 час, с МПБ в случае чистой культуры (после микроскопии) - высев на бульон с лактозой и индикатором Андрадэ и в пробирки со средой Симмонса или Козера 24 час.В случае роста на МПБ неоднородной культуры, что часто бывает при двойных, но монолитных внешне колониях на среде Эндо, результат исследования задерживается еще на одни сутки для выделения грамм-отрицательных палочек.Однако известный способ имеет ряд суще. ственных недостатков, заключающихся, вопервых, в том, что для индикации ЕзсЬепа со требуется минимум 3 - 4 суток. Длительность такого способа несовместима с исследоПо предлагаемому спосооу выращиваниепосевного материала осуществляют на питательной среде, состоящей нз пептона, лактозы,15 поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, предпочтительно в течение 4 -20 час при температуре 42 5 - 43,5 С, а идентификацию посевов ведут по изменению цвета20 среды в ярко-зеленую окраску (положительная реакция),Для дифференциации ЕзсйепсЬа со 11 от Вас 1 епцтп с 11 гоЬас 1 ег из посевов с положительнойреакцией осуществляют высев штрихом на25 секторе чашек Петри со средой Симмонса споследующим выращиванием культур при температуре 37 С.Все это способствует ускорению и удешевлению, а также повышению чувствительности30 способа.283676 Составитель М. Андреева Редактор Е. С. Братчикова Корректор Т. А. Джаманкулова Заказ 3649/15 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, ЖРаушская наб., д. 45 Типография, пр. Сапунова, 2 3Предлагаемый способ заключается в следующем.11 сследуемые пробы разводят стерильной водой 1:10 и выше, после чего высевают на элективную и дефференциругощую среду, состоящую из пептона, лактозы, поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды.Пробирки с посевами ставят в термостат при 42,5 - 43,5 С на 4 - 20 час в зависимосги от бактериального загрязнения исследуемых проб. При наличии Езс 1 чепсЫа со 11 от 100 млн. до 10 тыс. бактерий в 1 лсл рост наблюдается через 4 - 8 час. На среде растут и изменяют цвет только бактерии Езс 1 чепсЫа со 11 и Вас 1 епшп с 11 гоЬас 1 ег.У ч е т р е а к ц и и. Если,в засеянных пробирках цвет среды не изменился, то это свидетельствует об отсутствии Езс 1 чепсЫа со 11 и Вас 1 епцгп сйгоЬас 1 ег. Изменение цвета среды в ярко-зеленый говорит о наличии Езс 1 чепсЫа со 11 и Вас 1 епцгп сйгоЬас 1 ег или одной из,них,При необходимости дифференциации Езс 1 чепсЫа со 11 от Вас 1 епцгп сНгоЬас 1 ег из пробирок с измененным цветом производят посев на среду Симмонса, которую накануне разливают тонким слоем в чашки Петри и подсушивают. Каждую чашку делят не более чем на четыре сектора. Пробирки с посевами, предназначенными для высева, перемешивают вращением между ладонями и высевают платиновой петлей (петлю освобождают от излишней среды- капли встряхиванием) штрихом строго по сектору, Чашки с посевами инкубируют 18 20 час при 37 С, При росте Вас 1 епцгп сИгоЬас 1 ег среда из оливково-зеленой становится ярко-синей.Езс 1 чепсЫа со 11 на среде Симмонса не растут.При смешанной культуре (т. е. в пробирке одновременно растут Вас 1 епцпч сйгоЬас 1 ег и Езс 1 чепсЫа со 11) на секторе наблюдаются редкие колонии (не сплошной рост по штриху) с изменением цвета среды также в ярко-синий (это говорит о наличии Вас 1 егшгп с 11 гоЬастег) и обязательно на этом же секторе участки без роста и изменения цвета среды (это говорит 5 о наличии Езс 1 гепсЫа со 11). Таким образом,предлагаемый способ является быстрым, дешевым, он прост в выполнении и высокочувствителен, так как позволяет сократить сроки исследования с 3 - 4 суток до 18 - 48 час в 10 зависимости от количества бактерий Езс 1 чег 1- сЫа со 11 и Вастепцгп с 11 гоЬас 1 ег в исследуемых пробах и и обнаруживать их до 1 микробной клетки в 1 г продукта. 15Предмет изобретения1, Способ выделения ЕзспепсЫа сог и Вас 1 епцгп сИгоЬас 1 ег из молока и молочных продуктов, предусматривающий разведение исследуемой пробы, посев и выращивание на пи тательной среде посевного материала притермостатировании с последующей идентификацией посевов, отличаюигийся тем, что, с целью ускорения и удешевления способа, а также повышения его чувствительности, выращива ние посевного материала осуществляют напитательной среде, состоящей из пептона, лактозы, поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, а идентификацию посе вов ведут по изменению цвета среды в яркозеленую окраску (положительная, реакция).2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что,с целью дифференциации Езс 1 чепсЫа со 11 от Вастепцгп с 1 тговас 1 ег, из посевов с положи тельной реакцией осуществляют высев штрихом на секторы чашек Петри со средой Симмонса с последующим выращиванием культур при температуре 37 С.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что 40 в процессе выращивания посевного материалатемпературу поддерживают равной 42,5 43,5 С, а выращивание осуществляют в течение 4 - 20 час.