219752

219752 Саюа Советских Социалистических РвспублинВсеоо юег:аяатенто-тох н сокал библиотека УЬА Зависимое от авт. свидетельства5.7111.1966 ( 1099337/31-1 л. 301 т, 2,аявлен динением заявкиприс Приори ЧПК А 611 Комитет по дела обретении и открыти рн Совете Министров ллетень19 Опубли ано 14.И,196 УДК 547.995,15;611.01убликования описания ЗО.Л 11.1968 вторызооретения М, Бычков и гт. Ф, Колесникова аявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТ Известны способы получения гиалуроновой кислоты из пупочных канатиков человека путем экстракции водой и обработки экстракта в заморокенном при - 10 - 14 С состоянии этанолом. 5В предлагаемом способе в отличии от известных экстракт из пупочных канатиков последовательно обрабатывают двойным объемом предварительно охлажденного этанола в присутствии ацетата калия, удаляют примеси 1 сульфатированных мукополисахаридов гексамминкобальтхлоридом, примеси нейтральных гликопротеидов - катион итом, очищенный раствор замораживают и обрабатывают трехкратным объемом этанола в присутствии 1 яцетата натрия.Это позволяет упростить способ получения гиалуроновой кислоты, увеличить степень се очистки и исключить деполимеризацию.Пример, Пуповины человека очищают от 2 кровеносных сосудов, отмывают от крови, измельчают в охлажденной мясорубке и обезвоживают трехкратной обработкой охлажденным до 2 - 4 С ацетоном, используя его каждый раз в пятикратном количестве (по объему). После удаления ацетона фильтрованием и высушивания на воздухе ткань измельчают в шаровой мельнице до пылевидного состояния. 10 г полученного порошка при энергичном растирании заливают 100 мл дистиллиро ванной воды, насыщенной хлороформом, и оставляют на ночь в закрытом сосуде при 2 - 4 С. Набухшую ткань прп этой же температуре измельчают в стеклянном гомогснпзяторс, прибавляя воду так, чтобы объем смеси составил 200 лл, оставляют на 2 суток при 2 - 4 С, отделяют экстракт центрпфугпрованпем (3000 об/,5 гггн) и сливают. Оставшуюся тканевую массу повторно экстрагируют 300 лг,г воды при тех же условиях, Экстракты объединяют, центрифугируют 1 ч. при 5000 об/лгггн и 2 - 4 С. К надосадочной жидкости прибавляют ацетат калия в таком количестве, чтобы его концентрация после прибавления двух обье. мов этанола составила 10 пго. Экстракт, содсржящий яцетят кали, и спирт охляждяют до - 10 - 14 С и смешивают с этанолом, нс допуская повышения те.,гпературы более 2 - 4 С. Смесь оставляют на 2 суток прп 2 - 4 С и отделяют осадок при 3000 об/пгин, промывая его один раз 80%-ных этанолом, три раза 96%. ным этанолом, охлажденным до - 10 - 14"С и в заключении - три раза эфиром. Промытый осадок сушат над хлористым кальцием и стружками парафина в вакууме.Полученный неочищенный препарат растворяют в 180 - 200,5 г,г воды и прибавляют к нему раствор гексамминокобальтхлорида так, чтобы его концентрация в 2 раза превышала концентрацию гиалуроновой кислоты. Смесь зя219752 Предмет изобретения Составитель В. А. Таратута Редактор Н. Я, Кузнецова Техред Л. К. Малова Корректор Л. В. ЮшинаЗаказ 2355/20 Тираж 530 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, пр. Сапунова 2 мораживают с последующим медленным оттаиванием при 2 - 4 С. Образующийся осадок удаляют центрифугированием при 5000 об(мин, К надосадочной жидкости добавляют 10 г катионита Амберлит ИРв натриевой форме для удаления избытка гексамминокобальтхлорида. К прозрачному раствору добавляют 10 г катионита в Н-форме, оставляют на 4 - 5 час при 2 - 4 С и отделяют смолу центрифугированием. К раствору добавляют ацетат натрия так, чтобы его концентрация после осаждения гиалуроновой кислоты тремя объемами этанола составила 1 в/в. Перед осаждением раствор замораживают и приливают к нему спирт, охлажденный до - 10 - 14 С. Выпадающий нитевидный осадок гиалуроновой кислоты оставляют под маточным раствором на ночь при 2 - 4 С, после чего отделяют на центрифуге при 3000 оО/лшн, промывают спиртом, эфиром и сушат, как указано выше. Окончательное высушивание производят в вакууме над фосфорным ангидридом. Выход 3,0 - 3,5 от сухого веса исходной ткани. Способ получения гиалуроновой кислоты изпупочных канатиков человека путем экстракции водой и обработки экстракта в замороженном при - 10 - 14 С состоянии этанолом, 10 отличаюцийся тем, что, с целью упрощениятехнологии, улучшения очистки и исключения деполимеризации, экстракт из пупочных канатиков последовательно обрабатывают двойным объемом предварительно охлажденного 15 этанола в присутствии ацетата калия, удаляют примеси сульфатированных мукополисахаридов гексамминкобальтхлоридом, примеси нейтральных гликопротеидов - катионитом, полученный раствор замораживают и обраба тывают трехкратным объемом этанола в присутствии ацетата натрия.