Способ определения популяций лимфоцитов на мазках

(5 ЕТЕН ЕИ ПИ ВТ ный жене овал во дийгическая цито 162-164, 172 Я ПОПУЛ ине, а ть исакиях ского бр ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТВЕДОМСТВО СССР(71) Межотраслевой научнцентр по физике живого и мрезонансной терапии "Видгу(56) Хейлоу Ф.Г,Дж, Гематохимия, - М.:Медицина, 198174,(54)СПОСОБОПРЕДЕЛЕ ЛИМФОЦИТОВ НА МАЗ Изобретение относится к медиц именно к иммунологии, и может бы пользовано в лабораторных исследо с целью определения иммунологич статуса организма. Способ осуществляют следующиМазок крови из пальца, предварительнообработанного спиртом, в течение 3 мин фиксируют в пазах нейтрального формалина, промывают дистиллированной водой исушат.Готовят инкубационную среду следующего состава.10 мг санафтилацетата натрия растворяют в нескольких каплях ацетона. Таким же образом готовят раствор 20 мг нафтол-АЯ- фосфата. Полученные растворы субстратов последовательно вводят в общий ацетатный буферный раствор в количестве 40 мл, для приготовления которого 2,7 г уксуснокислого натрия предварительно растворяют в 100 мл дистиллированной воды и доводят рН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью является повышения точности способа за счет выявления на одном мазке суб популяций лимфоцитов и Т-лимфоцитов. Цель достигается тем, что мазок красят средой одновременно на выявление активности кислой фосфотазы и неспецифической эстеразы. Дифференциация клеток проводится по характеру распределения в клетках гранул кислой фосфотазы и кислой неспецифической эстеразы. Способ позволяет выявить Т-супрессоры и Т-киллеры, О-лимфоциты, В-активированные лимфоциты и В-лимфоциты. раствора до 5-5,4, используя для этого 50- ную уксусную кислоту (раствор М 1).4 г фуксина основного для фуксинсернистой кислоты растворяют в 100 мл 28 раствора НС и получают в результате 4-ный раствор парарозанилина. На дистиллированной воде готовят 4-ный раствор натрия азотистокислого. Растворы парарозанилина и натрия азотистокислого смешивают по 8 капель каждого и после прохождения реакции азосочетания (1:1,5 мин при нормальных условиях) получают раствор ЬЬ 2.Раствор В 2 вводят в раствор М 1, полученную таким образом инкубационную среду нагревают до 37 С и помещают в нее подготовленный мазок, Время инкубации в термостате 1-2 ч. В ходе инкубации степень окраски контролируют под микроскопом.Окрашенный мазок промывают дистиллированной водой и докрашивают для выявленияядер клеток 1-ным раствором метилового зеленого, отмытого хлороформом от фиолетовой фракции. Затем оконча1832184 Составитель Л.СтебаеваТехред М.Моргентал Корректор С.Пекарь Редактор Заказ 2807 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 тельно промывают, сушат и микроскопируют с иммерсионным маслом при окуляре 10" и обьективе 90. При этом в мазках крови одновременно выявляют активность неспецифической эстераэы в виде крупно или мелкогранулярной зернистости и кислой фосфатазы в виде темно-розовых пятен или средней и мелкогранулярной зернистости, ядра клеток окрашены в зеленый цвет,Совместная окраска мазков на неспецифическую эстеразу и кислую фосфатазу позволяет установить, что при наличии в Т-лимфоцитах крупногранулярной зернистости, характерной для Т-хелперов, актив, ность кислой фосфатазы выглядит в виде одного темно-розового пятна. Для темно- розовых пятна кислой фосфатазы мелкогранулярная зернистость характерна для Т-супрессоров. Для Т-киллеров характерна крупногранулярная зернистость кислой фосфатазы в виде округлых или полигональных гранул и мелкогранулярная зернистость, В-лимфоциты не выявляют активность обоих ферментов. В-активированные лимфоциты имеют мелкогранулярно-диффузную окраску кислой фосфатазы и мелкогранулярную окраску, О-лимфоциты также имеют мелкогранулярную активность. Отличия В-активированных и О-лимфоцитов состоят в том, что первые имеют размер средних или больших лимфоцитов, а также меньшую плотность окраски ядра метиловым зеленым,Следует указать, что правильность идентификацииТ-супрессорови Т-киллеров по активности кислой фосфатазы в сочетании с типом окраски на эстреэу соответствует тому, что в Т-супрессорах и Т-киллерах должна проявляется соответственно "очень высокая" и просто "высокая" активность кислой фосфатазы. Предлагаемый способ позволяет на одном мазке и в один прием получить полную и достоверную информацию как о популяциях лимфоцитов, так и о субпопуляциях Т лимфоцитов, что делает его удобным иинформативным при иммунологических исследованиях.Формула изобретения Способ определения популяций лимфо цитов на мазках крови путем инкубации всреде, содержащей нафтол-АЗ-фосфат, парарозанилин, натрий азотистокислый и ацетатный буфер, с последующим докрашиванием ядерным красителем и идентифика цией клеток по размеру и наличиюокрашенных гранул и лизосом, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа эа счет выявления субпопуляцией Т-лимфоцитов, среда дополни тельно содержит а-нафтилацетат натрияпри следующих соотношениях компонентов, мас.:Нафтол АЗ-фосфат 50,0;50,5 а-Нафтилацетат натрия 25,0,25,5 Натрий азотистокислый4-ный 3,03,1 Парарозанилин 4-ный 3,03,1 Ацетатный буферрН 5,0-5,2 Остальное 30 и при наличии в клетке розовой лизосомы5,7 мкм и темно-синих гранул определяют Т-хелперы, а розовых лиэосом более одной и мел когрануля рной темно-синей зернистости-Т-супрессоры, при наличии розовых ли эосом 1,01,5 мк и темно-синеймелкогранулярной зернистости-Т-киллеры, а розовой и темно-синей мелко- и среднегранулярной зернистости-О-лимфоциты и В-активированные лимфоциты, а при отсут ствии лиэосом и гранул в клетке- В-лимфоциты.