Способ определения генетической идентичности индивидуумов

( 9) 1)5 6 0 53 С 12 М 15 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ о-исследовательскийрофилактики инфекаговещенский госукий институт А.Сорокина 79, чо 119, М 4,9 р ЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕИ ИНДИВИДУУМОВ осится к биологии и следованию биологиГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Киргизский научнинститут экологии и иционных болезней, Бдарственный медицин(54) СПОСОБ ОПРЕДЕСКОЙ ИДЕНТИЧНОСТ(57) Изобретение отнмедицине, точнее к ис Изобретение относится к биологии имедицине, точнее, к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами,Цель изобретения - ускорение и упрощение способа,П р и м е р 1. Используют человеческиелимфоциты и аутогранулоциты, выделенныеиз периферической крови донора А в двухступенчатом градиенте фиколл - верографина (б = 2,007 и 1,119 г/смз), Фракциюлимфоцитов (= 1,077 г/смз) и фракцию гранулоцитов (б = 1,119 г/смз) трижды отмывают в среде 199. Фракцию лимфоцитов, дляудаления моноцитов, инкубируют в течение1 ч при 37 С в емкости из пластика (например, в бакпечатках однократного применения) в среде 199.Монослой гранулоцитов готовят инкубированием этих клеток в среде 199 (исходная концентрация гранулоцитов - 9 х 10 мл)на покровном стекле в бакпечатке втечение ческих материалов человека и животных иммунологическими методами, Цель изобретения - ускорение и упрощение способа, Сущность изобретения; у лимфоцитов определяют способность образовывать розетки с гранулоцитами и при наличии феномена розеткообразования делают вывод о генетической идентичности доноров лимфоцитов и гранулоцитов. Положительный эффект; применение данного способа значительно упрощает процедуру иммунологического скрининга донор-реципиент в трансплантологии. 1 ч при 37 С. Затем бакпечатку освобождают от среды 199 с неприлипшими гранулоцитами и помещают в бакпечаткбч 0,5 мл лимфоцитов (в концентрации 2 х 10 /мл среды 199). После инкубации лимфоцитов с гранулоцитами в течение 1 ч при 37 С препарат фиксируют добавлением в инкубационную среду 1 капли 3;-ного раствора глутарового альдегида.Через 10 мин покровное стекло извлекают из бакпечатки, высушивают, проводят дополнительную фиксацию в этиловом спирте 15 мин и окрашивают по Романовскому-Гимза - 45 - 60 мин, Препаратпромы-вают 5-7 раз дистиллированной водой, помещают на предметное стекло и высушивают.При помощи светового микроскопа под иммерсией регистрируют сто лимфоцитов и определяют процент этих клеток, присоеди-, нившихся к своей поверхности 3 и более гранулоцита.1800366 Составитель В.БрусиловскаяТехред М.Моргентал . Корректор Л.Филь Редактор С,Кулакова Заказ 1161 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Подучен следующий результат - в кровиу донора А 10лимфоцитов образуют розетки с. аутогранулоцитами, что свидетель-ствует о генетической идентичности,П р и м е р 2. Используют человеческие 5лимфоциты донора А и человеческие аллогенные гранулоциты донора Б. Последовательность выделения клеток из крови иметодика их взаимодействия аналогичныпримеру 1. 10Получен следующий результат - лимфоциты донора А не образуют розеток с гранулоцитами донора Б (аллогранулоцитами), т,е, лимфоциты генетически неидентичны гранулоцитам. 15П р и м е р 3, Используют человеческиелимфоциты донора А и крысиные гранулоциты (ксеногранулоциты). Последовательность выделения клеток из крови и методикаих взаимодействия аналогичны примеру 1. 20Получен .результат - человеческие лимфоциты (донора А) не образуют розеток скрысиными гранулоцитами (ксеногранулоцитами), т. е, лимфоциты генетически неидентичны гранулоцитам, взятым для 25исследования.Обследовайие 8 доноров показало, чтопроцент лимфоцитов, образующих розеткис аутогранулоцитами колеблется от 6 до 108,1 + 0,5 . Изучение способности лимфоцитов человека образовывать розетки саллогенными гранулоцитами, проводимое у8-ми. пар доноров, показало отсутствие розеткообразования при использовании аллогенных гранулоцитов, У 8-ми человек 35изучалась способность лимфоцитов образовывать розетки с гранулоцитами крыс. Лимфоцитов, образующих розетки сгранулоцитами крыс (ксеногенными гранулоцитами), обнаружено не было, Лимфоциты 8-ми крыс также не образовывали розеток с гранулоцитами человека и с гранулоцитамидругих крыс, но формировали розетки с аутогранулоцитами - 7,2 + 0,7.Следовательно лимфоциты образуют розетки лишь с сингенными, а не с алло- и ксеногенными гранулоцитами, поэтому данный способ может применяться для выявления генетической идентичности индивидуумов, Выявленный феномен взаимодействия лимфоцитов исключительно с аутогранулоцитами объясняется присутствием на поверхностной мембране гранулоцитов молекул НА класса 1, которые считаются молекулами самораспознавания, которые, по-видимому, играют доминирующую роль в данном варианте лимфогранулоцитарного взаимодействия,Таким образом предлагаемый способ позволяет за 5 - 6 ч определить генетическую идентичность индивидуумов, что, по сравнению с прототипом, в 10 - 12 раз быстрее, Кроме того, в отличие от прототипа, реализация предлагаемого способа не нуждается в условиях стерильности и в дорогостоящих и дефицитных компонентах, необходимых для длительного культивирования клеток,Ф о р мул а и зоб рете н ия Способ определения генетической идентичности индивидуумов, включающий совместное инкубирование клеток крови исследуемых пациентов и последующее опре. деление генетической идентичности, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, проводят инкубацию лимфоцитов донора с гранулоцитами реци пиента и при наличии розеток констатируют генетическую идентичность.