Способ получения ( i)-кислой фосфатазы предстательной железы человека

(19) (11)51)5 О 01 й 33/534//А 61 К 35/48 ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ической химии АНиологии АН БССРЩербань, Л.И,Влаейобз псапсег ге-232..ИЯ ( )-КИСЛОЙ АТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕФОСФАТАЗЫ ПРЕДСТЗЫ ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к усовершен-ствованному способу получения -кислой осфатазы предстательной железы человека ( -КФП), которая может быть использована в качестве компонента радиодиагностического набора для определения уровня кислой фосфатазы предстательной железы человека при диагностике рака предстательной железы, для оценки эффективности противоопухолевой терапии,Известен способ получения меченного -КФР (1). Субстрат при этом радиоиодирч 1 ют в присутствии хлорамина Т, используя ав 0,05 М ацетате натрия рН 6,0. Маркер получают с низким радиохимическим выходом (около 28 О/о), Известен способ получения (2 )-КФП методом конъюгации (2) с использованием -реактива Болтона-Хан 125тера,-сукцинимидил-(4-окси-, 5- - д 125 йодофенил)-пропионата, получают маркер(57) Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для получения меченной -кислой фосфатазы предстательной железы человека. Цель изобретения - увеличение выхода целевого продукта и повышение его специфичности, Кислую фосфатазу предстательной железы человека рарионодируют с меченным 1- в присутствии хлорамина Т125и в 0,05 - 0,25 м боротном буфере рН 7,4-9,0 с последующей очисткой гель-фильтрацией, Выход увеличивается по сравнению с прототипом в 2 - 3,5 раза с одновременным увеличением специфичности связывания с субстратом. с низкои удельнои активностью порядка 6 мкКИ/мкг,Наиболее близким к заявляемому является способ (прототип), который заключается в том, что кислую фосфатазу предстательной железы человека радиоиодируют 11 ав присутствии хлорамина Т. Радиоиодирование проводят в 0,5 М фосфатном буфере рН 7,4. Реакцию останавливают прибавлением метабисульфата натрия, растворенного также в фосфатном буфере. Реакционную смесь наносят на колонку с сефадексом и элюирют с фосфатным буфером, Полученная ( )-КФП имела специфичность около 85 О, Радиохимический выход составлял 10 - 22 О,Хотя авторы используют оптимальный для хлораминового метода буфер и рН (фосфатный буфер, рН 7,4) и большие количества окислителя (хлорамин Т, 20 мкг), существенным недостатком способа является низкий1767434 Формула изобретения Способ получения ( )-кислой фосфа 1 5тазы предстательной железы человека путем радиоиодирования в присутствии хлорамина Т в буферном растворе, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта буферным раствором, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его специфичности, радиоиодирование проводят в 0,05-0,25 М боратном буферном растворе рН 7,4-9,0,Составитель М. МакаренкоТехред М,Моргентал Корректор Н Милюкова Редактор С. Кулакова Заказ 3546 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 радиохимический выход и невысокая специфичность маркера на дату получения.Целью изобретения является увеличение радиохимического выхода и специфичность целевого продукта. 5Способ осуществляют следующим образом,Радиоиадирование КФП с 11 апроводят в присутствии хлорамина Т в 0,050,25 М Гзратном буфере при рН 7,4-9,0, 10Реакцию останавливают прибавлением ме-,табисульфита натрий растворенного в фосфатном буфере. Реакционную смесьнаносят на колонку с сефадексом и элюируют фосфатным буфером. 15П ример 1. Б ампулус 10 мкл 0,2 Мборатного буфера, рН 8, вносят 3 мкл (1 мКи)11 а 5, 10 мкл 10 мкг) хлорамина Т в 0,2 Мборатном буфере, рН 8, и 20 мкл (40 мкг)КФП, Реакционную смесь перемешивают 2030 секреакцию останавливают прибавлением 10. мкл (10 мкг) метабисульфита натрия. В ампулу вносят 10 мкл (2 мг)иодистого калия, 200 мкг 0,1 М фосфатногобуфера, содержащего 0,15 М хлористого 25натрия, 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 0,02% азида натрия. Реакционную смесь наносят на колонку (1 х 40 см)с сф сефадексом С - 100 и элюируют 0,1 Мфосфатным буфером, содержащим 0,15 М 30хлористого натрия, 0,1% БСА и 0,02 0 азиданатрия. Скорость элюции 6 мл/ч, фракциипо 1 мл, Радиохимический выход составил77,8%. Специфичность " )-КФП в пределах 89,1 - 96,3 о . 35П р и м е р 2. Процесс проводят попримеру 1, используя 0,05 М боратный буфер рН 7,4. Выход ц 5 елевого продукта 57,6 о .Специфичность ( )-КФП составляла 85,7 -1292. 40П р и м е р 3. Процесс проводят попримеру 1, используя 0,25 М боратный буфер рН 8. Выход целевого продукта 78,3 о , Специфичность маркера 88,3-95%.П р и м е р 4, Процесс проводят по примеру 1, используя 0,1 М боратный буфер, рН 9. Выхо 1 д 2 целевого продукта 46%, Специфичность ( )-КПФ в пределах 87,5 - 93,2 .5Заявляемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта в 2 - 3,5 раза по сравнению с прототипом. Необходимо отметить, что положительный эффект достигается за счет предложенных авторами изменений в классическом хлораминовом методе, где согласно литературным данным оптимальным для радиоиодирования является фосфатный буфер, рН 7,4. Найденные нами условия для мечения КФП позволили не только увеличить радиохимический выход при уменьшении в два раза количества хлорамина Т по сравнению с прототипом, но и получить высокоиммунореактивный маркер. Связывание с антителами целевого продукта 85,7 - 96,3 о , что выше, чем у прототипа.Разработанный способ увеличивает выход маркера, делает технологию получения 1255)-КФП более экономной, улучшает качество маркера, используемого как компонент набора для радиоиммунологического микроанализа.