Способ определения модифицированных липопротеидов крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 20015 А33/9 РЕТЕН ЕТЕЛЬС ВТОРСКОМУ ий институт ого центра сследоваМ.: Медицик медицинекардиологии ия - упрощение способастадий. я путем злектрофорети я липидов из фракций ифугирования 8% ПЭГпри 2800 д и ультрацен ПЭГпреципитато СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ И ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ(71) Научно-исследовательсккардиологии Томского научнАМН СССР(56) Лабораторные методыния/Под ред. В.В.Меньшикована, 1987, с. 248-249,Изобретение относится может быть использовано в терапии,Цель изобретен за счет сокращения Цель достигаетс ческого разделени крови после центр 6000 преципитатов рифугирования 8% при 25000 д. Способ осуществляют следующимК 1 мл сыворотки крови добавляют 40 мл 8% ПЭГ, инкубируют 1 ч при комнатной температуре и центрифугируют 40 мин при 2800 д, Часть полученного супернатанта повторно центрифугируют 40 мин при 25000 д .Осадок дважды промывают по 0,25 мл раствора преципитата после первого и второго центрифугирования используют для злектрофоретического исследования.- Приготовление судана Б; 400 мг судана Б растворяют в 20 мл зтиленгликоля на(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННЫХХ ЛИПОПРОТЕИДОВ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии для определения модифицированных липопротеидов крови у больных ишемической болезнью сердца. Цель иэобретения - определение упрощения способа. Цель достигается путем злектрофоретического определения модифицированных липопротеидов крови после центрифугирования и ультрацентрифугирования 8% ПЭГпреципитатов. кипящей бане в течение 50 мин, фильтруют и хранят в стеклянной посуде; - Ж- приготовление геля агароэы: 320 мг агарозы А фирмы "Сигма" растворяют в 20 мл воды при кипячении, затем помещают в Ео термостат при+55 С; добавляют 20 мл раствора альбумина (1 г альбумина в 200 мл веронал-мединалового буфера, рН 8,6).З мл ф геля агарозы наносят на обезжиренное горизон тально установленное стекло, помещают метал Я лический стержень 20 х 2 мл, который при О эастывании геля убирают магнитом; СР- к 0,25 мл раствора преципитата 8%ПЭГдобавляют к раствору красителя , судана Б, помещают на 1 ч в темное место, затем добавляют 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, прогревают при 550 С и подогретым наносят в желобок геля; а- предметное стекло помещают в камеру для злектрофореза слоем агарозы вниз, злектрофореэ проводят в течение 1 ч при напряжении 100 В, силе тока 40 - 45 мА;- злектрофореграмму фиксируют в 5%- ном растворе уксусной кислоты в течение 1 ч, затем высушивают между листами фильт 1720015ровальной бумаги, непрерывно смачивая 96%-ным этиловым спиртом,П р и м е р 1. Больной Г м., 54 года, поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 20.12.84 г, с жалобами на сжимающие боли за грудиной при ходьбе, Болевые приступы бывают до 10 раз в день, снимаются нитроглицерином,На ЭКГ: рубцовые изменения в области верхушки и передней стенки левого желудочка,Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,3; триацилглицериды 0,7; ХМ ЛПВП 1,54.При электрофорезе ба ПЭГпреципитатов крови выявленыр-ЛП (ЛПНП), Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8 ПЭГприцепитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин), Выявлены а -ЛП (модифицированные формы ЛПВП).Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения, ФК , в крови присутствуют модифицированные ЛПВП.П р и м е р 2. Больной Н., м., 55 лет, поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 13 02 85 г. с жалобами на сжимающие боли за грудиной, иррадиирующие в левую руку. Боли усиливаются при ходьбе.На ЭКГ, ритм синусовый, 70 ударов в 1 мин, косовосходящая депрессия ЯТ; в Чз-б(-) Т в АЧ, ЧЗ, Ч 41 Ч 5Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,5; триацилглицериды 1,16; ХС ЛПВП 1,03.При электрофорезе 8% ПЭГпреципитатов крови выявлены /-ЛП (ЛПНП). Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8 ПЭГпреципитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин). Выявлены а-ЛП (модифицированные ЛПВП),Способ применен у 62 больных ИБС и у 19 пациентов позволил выявить модифицирование Л П В П.П р и м е р 3. Больной М., м 64 г поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 17.01.85 г, с жалобами на одышку в покое, сердцебиение, колющие боли в области сердца. Боли не купировались приемом анальгетиков. На ЭКГ-мерцание предсердий, ЧСС 103 удара в 1 мин, тахисистолическая форма, признаки гипертрофии левого желудочка, желудочковая зкстрасистолия.Результаты лабораторного обследования: активность А в АГ,3 ммоль/мг, АлАТ - 0,74 ммоль/л,ч ХСобщ - 7,8 ммоль/л; ТАГ - 0,93 ммоль/л; ХС ЛПВП - 0,9ммоль/л. При электрофорезе липопротеидов в геле агарозы выявлены 3-ЛП и преД -ЛП после диссоциации 8% ПЭГ-.6000 пре 5 ципитатов крови.Дополнительно проведено определениемодифицированных форм ЛПНП и ЛПОНПбез диссоциации 8% ПЭГпреципитатовкрови; выявленыР-ЛП и пре-р-ЛП.10 Диагноз: ИБС, стенокардия, напряжения ФКН; в крови больного присутствуютмодифицированные ЛПНП и ЛПОНП.П р и м е р 4. Больной Т., м 56 лет,поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 21.02.8515 г. с жалобами на колющие боли в областисердца, возникающие после физическогонапряжения, одышку.На ЭКГ: вертикальное положение осисердца, ритм синусовый, 80 ударов в 1 мин,20 ишемия передней стенки левого желудочка.Результаты лабораторного обследования; ХСобщ - 6,8 ммоль/л:ХС ЛПВП - 1,4ммоль/л; Т АГ - 0,75 ммоль/л. При электрофорезе пипопротеидов в геле агарозы выяа 25 лены/3-ЛП после диссоциации 8 оПЭГ преципитатов крови,Дополнительно проведено определение модифицированных форм ЛПНП иЛПОНП без диссоциации 8% ПЭГпре 30 ципитатов крови. Выявлены /3- ЛГ 3.Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения ФК ; в крови больного присутствуютмодифицированные ЛПНП и ЛПОНП,Способ применен у 57 больных ИБС и у35 29 из них позволил выявить модифицированные ЛПНП и ЛПОНП,Формула изобретенияСпособ определения модифицированных липопротеидов крови путем йнкубации40 сыворотки крови с красителем с последующим электрофоретическим разделением ивыявлением фракций липидов, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий, сы 45 воротку крови перед инкубациейобрабатывают 8%-ным раствором ПЭГ 6000, смесь центрифугируют 40 мин при28009, отбирают супернатант, часть его повторно.центрифугируют 40 мин при 25000 д,50 полученный супернатант и супернатант после первого центрифугирования раздельноинкубируют с красителем, разделение проводят в геле агарозы на пластинах, при этомв пробах супернатанта после первого цент 55 рифугирования определяют модифицированные липопротеиды вьсокой плотности, апосле второго центрифугирования - модифицированные липопротеиды низкой иочень низкой плотности.