Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 3 531 ОП НИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ИДЕТЕЛ ЬСТВУ К АВТОРСКОМ о этим способом невысокой чувс щие восновном т е вступающие в р язывающими ан. Одна гены с реагирую нинами, лементс получают антитвительностью, лько с агглютиеакцию с компителами и не ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ(72) А,Л. Воробьев, В,И. Белобаб,Н.П. Иванов и К.м. Мукашев(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНАДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза. Цель изобретения - повышение чувствительности антигена, Основой для приготовления антигена служит вакцинный штамм 19 и бруцеллеэный фаг "Тб". БруцелИзобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза.Известен способ получения бруцеллез- .ного антигена,заключающийся в том, что выросшую культуру штамма 19 смываютстерильным 0,5 ф-ным фенолизированным физиологиче-: ским раствором (рН 7,0-7,2), Полученную суспенэию инактивируют при температуре 80 С в течение 60 мин. стабилизируют при : 2-40 С втечение 10 дней и определяют активность,Недостатком данного способа является то, что получаемый антиген обладает невысокой чувствительностью.Известен также способ получения бруцеллезного цветного антигена для роз-бен,.Ж 1713592 А 1(5)5 А 61 К 39/10, 6 лезный фаг адсорбируют на бруцеллах из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку в течение 22-24 ч при 2-4 С. Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом центрифугируют. Ыэ осадка готовят 100 млрд. взвесь на 0,5-ном карболизированном физиологическом растворе и окрашивают краской роз-бенгал, Окрашенную суспензию бруцелл разводят лимонно-фосфатной смесью (рН 3,6), изготовленной на 5-ном растворе хлористого натрия, Полученный антиген способен вступать в реакцию с антибруцеллезными и антифаговыми антителами, что приведет к повышению его чувствительности. Кроме того, антиген, со- держащий фаг, способен выявлять животных, больных острой или хронической формами бруцеллеза при использовании только реакции агглютинации и роэ-бенгал пробы,гал пробы, заключающийся в том, что чистую культуру штамма 19 смывают стерильным 0.50-ным фенолизированным физиологическим раствором, инактивируют при. температуре 80 С, Суспенэию инактивированных клеток окрашивают 1-ным водным раствором краски бенгальской розовой и ресуспендируют в буферном разбавителе, включающем едкий натр, фенолизированный физиологический раствор и молочную кислоту.1713592 Составитель В.РомановаРедактор Л,Гратилло Техред М.Моргентал Корректор М, Демчик Заказ 644 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г, Ужгород. ул, Гагарина, 101 пригодные для выявления хронических и латентных форм инфекции.Целью изобретения является повышение чувствительности антигена.П р и м е р 1. Основой для приготовления антигена служат вакцинный штамм 19 ибруцеллезный фаг Тб.Бактериальную массу для получения антигена выращивают на рекомендуемых длябруцелл плотных питательных средах.Размножение фага Тб проводят в бактериальных клетках штамма 19 в обычной длябруцелл жидкой питательной среде.Бруцеллезный фаг адсорбируют наклетках бруцелл из расчета 10-100 фаговыхкорпускул на 1 микробную клетку в течение22-24 ч при температуре 2-4 С. Затем взвесьбактерий с адсорбированным фагом цент,рифугируют при 5000-600 Ь об/мин в течение. 30 мин и сливают надосадочнуюжидкость. Из бруцелл, находящихся в осадке, готовят 100 млрд. взвесь на 0,5-номкарболизированном физиологическом растворе. Для определения активности и установления рабочих титров в реакцииагглютинации, связывания комплемента(РСК) или других серологических реакциях,данную взвесь титруют по общепринятымметодикам,Роз-бенгал антиген готовят путем окрашивания 100 млрд. суспензии бруцелл, с щсорбироваюным фагом краской роз-бенгал,Окрашенную суспензию разводят лимоннофосфатным буфером (рН 3,6), приготовленным на 5-ном растворе хлористого натрия.При испытании полученного бруцеллез.ного антигена, содержащего фаг, установлено следующее.Результаты исследования сыворотоккрови животных, реагирующих со стандартным антигеном в реакции агглютинации(РА) и роз-бенгал пробы (РБП) или одновременно в РА, РБП и РСК, полностью совпадают с результатами при использовании бру.целлезного антигена с адсорбированнымфагом.Сыворотки крови, негативно реагирую 5 щие со стандартным антигеном в РА и РБПи положительно в РСК/РДСК, дают положительные результаты с предлагаемым антигеном как в РА и РБП, так и в РСК/РДСК.Таким образом, использование антиге 10 на, содержащего специфический фаг, позволит усовершенствовать диагностикубруцеллеза и будет способствовать более. полному выявлению животных, больныххронической и латентной формами инфек 15 ции, у которых могут отсутствовать или содержаться в незначительном количествеантибруцеллеэные антитела. В то же времяантифаговые антитела обязательно присутствуют у хронически и латентно больных,20 которые будут взаимодействовать с даннымантигеном,Применение комплексного диагностикума позволит уменьшить количество серологических. тестов и будет способствовать25 более полному выявлению животных, больных бруцеллезом.. Формула изобретенияСпособ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза. включа 30 ющий выращивание штамма Вгцсе 11 ааЬогоз 19 на плот 11 ой питательной среде,смыв выросшей культуры 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором,инактивацию бактериальных клеток нагре 35 ванием, окрашивание роз-бенгалом с последующим ресуспендированием вбуферном растворе и стандартизацией целевого продукта,отл ичаю щийся тем,что, с целью повышения чувствительности,40 перед окрашиванием на инактивированныебактериальные клетки адсорбируют бруцеллезный фаг ТБ в количестве 10-100 част. на1 клетку.