Способ определения токсичности химических веществ

)5 6 01 й 33/68 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ иовочасический агент лаборатор, Делают экспозицию, обесразвитие токсического , Забивают животных, извлечки. Определяют активность азы (й-ацил-Д -аминокислоазы, КФ 3,5,1.14) в тканях Ацилазу тканей определяют методике. К 0,9 мл 0,01 М рмил-Д 1.-метионина в 0,1 М Вводят ток ным животным печивающую действия (2 - 4 ч) кая печень и по фермента ацил та-амина гидрол печени и почек по следующей раствора й-фо(71) Волгоградский государственныйцинский институт(56) Авторское свидетельство СССРМ 1163264, кл. 6 01 й 33/48, 23,06,85.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ(57) Изобретение относится к медицине,преимущественное применение найдет вбиохимии и токсикологии при определении Изобретение относится к медицине, преимущественно применение найдет в биохимии и токсикологии, и может быть использовано для определения токсичности химических веществ.Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности.Способ осуществляют следующим абратоксичности химических веществ, Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности за счет снижения количества лабораторных животных. Цель достигается тем, что в гомогенате ткани печени лабораторных животных определяют активность фермента ацилазы (М-ацил-ДЕ-аминокислота-аминогидролаэы, К.Ф,3.5,1.14) через 2 - 4 ч после введения животным токсического вещества. О токсичности вещества судят по достоверному снижению уровня активности фермента по сравнению с контролем, Способ позволяет в два раза ускорить определение токсичности химических веществ. Фосфатном буфере (рН 7,5) добавляют О,1 мл экстракта ткани. Отбирают 0,2 мл из этой инкубационной смеси и добавляют их к 3,0 мл 0,1 М боратного буфера (рН 9,7) (контрольная проба), Через 1 ч инкубации при 37 С отбирают изинкубациь.ной смеси 0,2 мл и добавляют к 3,0 мл О, М боратного буфера (рН 9,7) (опытная проба). Затем к контрольной и опытной пробе добавляют по 0,5 мл красящей смеси, состоящей из 0,03- ного оаствора о-фталевого альдегида и 0,01;-ного раствора В -меркаптоэтанола в 0,1 М боратном буфере (рН 9,7) с последующей спектрофотометрией опытной и контрольной проб при длине волны 340 нм.П р и м е р 1. Группе беспородных белых мышей (самцов) массой 18 - 20 г внутрибрюшинно вводят эндотоксин, выделенный из ЯатопеПа 1 урЫтиг 1 ов, в дозе 10 мг/кг веса, Контрольной группе параллельно вводят1686376 Мйп, после ввепення СС), нп/экг4 8 10 (гтпокоза, 52-нытзраствор) Актнвность апнпазн,ЭнпотоксннМЕ и Реня, ч бонтропьнпягруппа,Ма в Фернен 2, 1 т О, 25 2, 07 - О, 31 1, 97 5 О, 2 1, 92 3 О, 28 3, 3 1 О, 3 1,97 + 0,22 3,0: 0,29 Ьпнлаза 1печенн 1 сгг . Оз 25 3 0 . 0128 1,1 6 0,251,91 . 0,17 1,20,23 1,19 5 0,22 1 37550 266 1,4110,29 1,17 0,271,54 т 0,42ЭптО Зоф 2,9 т О,З 1 в 35 Ое 13 Зф 11025 1,9450,43 3,210,26 г,зО,З 6" З,1+О,21 3,3 ." 0,38 3, 1 : 0,27 3,2 . О,З 2,640,37 2,5510,31 2,4110,41 2 9-0 28 Зп 0,26 2 75 ЗО 28 2 460,31 Разпнчне опыта н контроля постоверно, вероятность опнбк ня более 0,05. Составитель Т,МалютинаТехред М,Моргентал Корректор М,Кучерявая Редактор ИгДербак Заказ 3595 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 в том же количестве физиологический раствор, Опытная группа состоит из 24 животных, а контрольная - из 30, Затем животных забивают через 2,4 и 6 ч соответственно, У них берут и приготавливают экстракт из печени, в котором затем определяют активность фермента ацилазы по предлагаемой методике. Полученные данные статистически обрабатывают методами вариационной статистики с учетом коэффициента Стьюдента.П р и м е р 2. Группе беспородных белых мышей (самцое) массой 22-24 г внутрибрюшинно вводят четыреххлористый углерод в растворе в дозах 1 и 4 мл/кг веса, Контрольной группе вводят физиологический раствор, Опытная группа состоит из 21 животного на каждую дозировку вводимого вещества, Затем животных забивают, у них берут печень, готовят экстракт и определяют активность фермента эцилаэы.В таблице показано достоверное уменьшение активности ацилазы через 2-4 ч после введения эндотоксина и четыреххлористого углерода.Использование предлагаемого способапозволит в 2 раза ускорить определение 5 токсичности химических веществ по сравнению с известным,Формула изобретения Способ определения токсичности хими ческих веществ, включающий введение лабораторным животным токсического агента, забой животных, приготовление гомогената ткани печени с последующим определением активности фермента, о т л и ч э ю щ и й с я 15 тем, что. с целью ускорения способа и повышения его экономичности эа счет снижения количества лабораторных животных, определяют активность фермента ацилазы (чацил-Д:аминокислота-аминогидролазы) и 20 по снижению уровня активности ферментав течение 2-4 ч после введения вещества по сравнению с контролем судят о токсичности вещества